富H2溶液对肝细胞及肝脏的辐射防护效应及机制的研究.pfg.pdf

富H2溶液对肝细胞及肝脏辐射防护效应及机制的研究 摘要 随着原子能在国防、工业、农业、医疗、科技等国民经济各领域的普及应用，核 能在巨大造福人类的同时，也给当今世界带来了严重的核辐射危险，给人类的健康与 安全带来了严峻的挑战。在前苏联切尔诺核电站事故给人类带来灾难性后果的记忆还 没有完全消除之时，2010年3月日本强烈地震造成的福岛核电站放射性核泄露事故 又引起了世界范围的核辐射恐慌。另一方面，放射治疗仍然是恶性肿瘤以及一些良性 疾病的重要治疗手段，可是辐射在杀伤肿瘤细胞的同时，也会对正常组织细胞造成损 伤，限制了放疗的应用和发展。人类不得不思考如何在有效利用核能的同时又能确保 自身的健康不受损害。 肝脏是人体的重要器官，其功能包括分泌FJ_卧t，摄入营养物质的代谢，消除废物， 储存糖原，以及合成血浆蛋白等。然而在肝癌以及其他腹部肿瘤的放射治疗过程中， 对J下常肝细胞的损伤却是不容忽视的，由辐射造成的肝毒性所引的辐射相关肝损伤经 常发生，成为放射治疗应用于肝内肿瘤治疗的最主要限制因素。肝脏也经常受到作用 于上腹部、右下肺、食管远端肿瘤、整个腹部或全身放疗过程中的辐射照射，导致肝 脏细胞和组织辐射损伤。如何降低辐射所造成正常组织细胞的损伤，探索高效、低毒 的辐射防护剂始终是国内外辐射防护研究的重点和难点。 2007年，Ohsawa等人发现氢气可以选择性减少细胞毒性氧自由基，发挥治疗性 抗氧化作用。从此，在世界范围内掀起了研究氢气生物学效应的热潮。氢气能够选择 性减少羟自由基的生物学效应引起了我们辐射防护研究者的兴趣，因为在辐射损伤中 大部分损伤是由羟自由基所导致。电离辐射对生物体构成的损伤，主要来自直接作用 和间接作用，其中间接作用引起的损伤占辐射损伤的70％．80％左右，羟自由基在其 中发挥了重要影响。抑制或者清除辐射所产生的大量自由基，提高机体的抗辐射能力， 从而保护机体组织和器官免受伤害，历来是辐射防护剂研究的重要途径之一。2008 年，我教研室首次将氢气应用于辐射防护研究领域，制备了可安全使用的富H2溶液， 探讨富H2溶液对体外培养细胞等的辐射防护效应，经实验证实这种富H2溶液具有良 好的辐射防护效果，开辟了氢气用于辐射防护的先河。 国内外目前用于肝脏等组织辐射防护的方法大多是利用天然植物提取物，细胞因 子，以及化学合成的药物等，它们大多的不足主要是毒副作用大，或是防护效价太低。 氢气选择性减少细胞毒性氧自由基的特性已被我们实验室证实对培养细胞、造血组织 和心脏组织具有良好的辐射防护作用，但是未见国内外研究氢气对肝细胞和肝脏辐射 损伤保护作用的报道。过去的研究已经表明辐射所造成的肝损伤很大～部分由辐射诱 导的氧化应激所致，近年来有人证明用吸入氢气的方式可以减少化学物质氧化应激对 第二军医人学硕士学位论文 肝细胞损伤，所以我们推测富H2溶液对肝脏可能具有很好的辐射防护作用。富H2 溶液既解决了直接使用氢气易燃易爆的危险性，又使得氢气更易储存和更容易被机体 所吸收，且其最大的优点还在于它基本无毒副作用。本课题以人肝细胞和小鼠肝脏为 研究对象，探讨富H2溶液对它们的辐射防护效应，具有很好的临床应用前景。 研究内容： 1．富H2溶液对人肝细胞的辐射防护效应：选取人正常肝细胞HL．7702(L．02细胞) 作为研究对象，建立细胞在不同照射剂量下的剂量存活曲线，在此基础上分别观察： ①富H2溶液对丫射线照射后细胞存活率的影响；②富H2溶液对Y射线照射后细胞凋亡情 况的影响。 2．富H2溶液对小鼠肝脏的辐射防护效应：①富H2溶液对Y射线照后小鼠肝功能的 影响：②富H2溶液对丫射线照后肝脏结构的影响；③富H2溶液对丫射线照后小鼠肝细胞 凋亡的影响。 3．初步探讨富H2溶液的辐射防护效应机制：①利用荧光探针标记检测Y射线照射 后富H2溶液清除羟自由基的效果；②分析富H2溶液对Y射线照后小鼠肝脏氧化损伤指 标羰基化蛋白(PC)及8．OHdO浓度的影响；③分析富H2溶液对照后细胞及小鼠肝脏 中凋亡相关蛋白表达情况。④测定腹腔注射富H2溶液后小鼠肝脏中的氢浓度。 实验方法： 1．富H2溶液及培养基的制备：利用本实验室建立、优化的已常规应用的成熟方法 制备富H2溶液。经氢电极检测氢气含量己达到过饱和状态(各种液体的氢气浓度分别 PBS0．814mmol／L)。 为：富H2纯净水0．823mmol／L