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TRAIL慢病毒载体构建及其在肝癌细胞中的表达
中文摘要
目的：
构建携带TRAIL基因的慢病毒表达载体并实现其在肝癌细胞株HepG2qb的稳定
长情况。
方法：
’
．EFl·GFP．T2A—Puro
2．脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物共转染293T细胞，包装产生
慢病毒颗粒，纯化并测定病毒滴度；
3．利用Western
blotting检测慢病毒感染HepG2后TRAIL蛋白的表达
4．利用M丌检测HepG2细胞的增殖
5．利用裸鼠体内实验，检测HepG2细胞在小鼠体内的生长情况。
结果：
酶切以及测序证实，成功构建携带TRAIL基因慢病毒载体，纯化的慢病毒滴度
为1．02×104
if虮tL，并发现当MOI=8时，重组慢病毒体外转染效率高。利用嘌呤霉素
筛选以及单克隆化后，获得稳定表达TRAIL的细胞系，经Western
blotting方法检测
结论：
成功构建了带有TRAIL基因的慢病毒载体，并实现其在HepG2的稳定高表达。
通过肝癌细胞和裸鼠体内实验证明了TRAIL基因能够抑制肝癌细胞的生长。
硕士研究生栾坤业(肝胆血管外科)
指导教师 张炳远教授 孙传东副教授
关键词：TRAIL；慢病毒载体；HepG2；细胞凋亡
ConstructionofLentiviralVector TRAILGeneandIts
Carrying
in Cells
ExpressionHepatocarcinoma
Abstract
Objective：
lentiviral vector TRAILandrealizeitsstable
Toconstruct carrying
expression gene
in carcinomacellline detectthe
hepatocellular HepG2．To proliferation
highexpression
of andobservethe ofTRAIL in inmice．
HepG2 growth hi曲lyexpressedHepG2
Methods：
to
and werecarriedout constructrecombinantlentiviral
1．PCR Double
digestion
vector
pCDH—CMV-TRAIL—EFl一GFP-T2A-Puro；
werecontransfectedwiththerecombinantlentiviralvectorand
2．The293Tcells
lcntivirus to lentiviral method．ne
produce particlesbylipofectamine
packageplasmid
lentiviruswas andvirustiterwas
purified measured；
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