荷叶黄酮苷分离纯化，化学结构表征及其生物活性的研究.pdf

摘要 摘要 日益严重的化学合成物质对环境的污染和毒性问题，使得人们对植物 天然产物的需求越来越关注。天然植物中的活性成分已成为人们研究的主 要对象之一。荷叶属睡莲科植物莲(NelumbonuciferaGaerth)的叶片，是国家 卫生部公布的即是食品又是药品的植物，主要分布于印度、中国、日本及 埃及，价廉易得。荷叶味苦、气味清香，具有解暑清热，散瘀止血，降脂 减肥及抗氧化作用等功效，是临床用于治疗咯血、鼻衄及尿血的特效药。 研究表明荷叶的生物活性和生理功能主要与其含有的功能性成分生物碱及 黄酮类化合物相关。目前国内外对荷叶的研究主要集中于生物碱，而对于 荷叶黄酮类化合物的研究较少，影响了对荷叶活性成分的利用和开发。 本文对荷叶主要功能性成分荷叶黄酮进行了较系统的研究，以期为荷 叶功能食品的开发和深加工开辟出一条新途径，为新型药物的研究提供有 益的指导，全面提高荷叶的经济利用价值。主要研究内容及所得实验结果 如下： 1．采用乙醇溶液提取法，通过正交实验优化提取荷叶黄酮的工艺条件。 h， 实验表明用60％的乙醇为溶剂来提取荷叶黄酮的最佳条件为75℃，2．0 液固比为40：1。荷叶黄酮的含量可达6．63％。 2．通过静态吸附实验研究AB．8和H103两种大孔吸附树脂对荷叶黄 酮的吸附特性，筛选出适合对荷叶黄酮进行初步分离纯化的树脂，并对其 进行了动态吸附特性研究，结果表明AB．8大孔树脂对荷叶黄酮具有良好的 吸附和解吸性能，经AB．8树脂吸附富集后，样品总黄酮含量可达36．73％。 3．采用HPLC对经AB．8大孔树脂初步纯化后的荷叶黄酮进行分离分 析，建立了荷叶黄酮高效分离及测定的最佳色谱分析条件：色谱柱为Agilent ODS mmx4．6mm C18反相柱(250 I．D．，5 lan)，流动相A：乙腈，流动相B： ml／min，柱温为 超纯水／甲酸(99．9／0．1；v／v)，进样量为10灿，流速为O．8 30℃，检测波长为254 l皿-20％A：2旧5 min,20_-30％A。 4采用高速逆流色谱对荷叶黄酮苷单体进行纯化及制各，并通过IR, MS， 1DNlVlR，2DNMR等现代仪器方法对其进行了结构鉴定。得到的四 n 摘要 种荷叶黄酮苷单体为金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷及首次在荷叶中发现 的槲皮素．3．O．桑布二糖苷。实验建立了高速逆流色谱对荷叶黄酮苷单体进 行纯化的条件：1)采用正己烷：醋酸乙酯：甲醇：水=1：5：1：5(v／v) 及检测波长254nm的色谱条件可从80 mg的经AB．8大孔树脂初步纯化后 的荷叶黄酮中制备得到纯度经HPLC检测达到97．5％的金丝桃苷9．1 mg， 95．8％的异槲皮苷4．6 mg，98．3％的紫云英苷3．0rag：2)采用醋酸乙酯：正 30℃，流速为1．8m．L／rain及检测波长254hi／1的色谱条件可从100 mg的经 AB．8大孔树脂初步纯化的荷叶黄酮中制备得到纯度经HPLC检测达到 98．6％的槲皮素．3．0．桑布二糖苷5．0 mg。 5．采用荧光光谱法、紫外光谱法研究在生理条件(pH=7．4)下荷叶黄酮 及紫云英苷与牛血清白蛋白的相互作用。结果表明荷叶黄酮及紫云英苷均 可与BSA结合并通过静态猝灭作用机制对BSA内源性荧光进行猝灭，在