牛膝多糖对树突状细胞表型及功能成熟影响.pfg.pdf

目录 一、摘要 中文论著摘要………………………………………………．1 英文论著摘要………………………………………………．4 二、英文缩略语…………………………………………………10 三、论文 前言………………………………………………………11。刖吾………………………………………………………l 材料与方法………………………………………………．．12 实验结果…………………………………………………．．15 讨论………………………………………………………20 结j沧………………………………………………………21 四、本研究创新性的自我评价………………………………………22 五、参考文献…………………………………………………．．23 六、附录 综述………………………………………………………26 在学期间科研成绩……………………………………………35 致谢………………………………………………………36 个人简介…………………………………………………．．37 ·中文论著摘要· 牛膝多糖(ABP)对树突状细胞表型及功能 成熟的影响 刖 声 牛膝，为苋科牛膝属的植物。分布于非洲、俄罗斯、越南、印度、马来西亚、 菲律宾、朝鲜以及中国等地，生长于海拔200米至1，750米的地区，常生长在山坡 Bidentata 林下，用药已有近千年历史。牛膝多糖(Aehyranthes 是采用现代提取技术从牛膝中纯化的分子量1400D多糖，为国家九五攻关项目中 唯一的中药项目。ABP通过与多种免疫细胞上受体结合发挥免疫调节作用并有抗 肿瘤、抗衰老、抗凝血保肝和抗病毒等功能。 树突状细胞(dendriticcell，DC)是目前已知的功能最为强大的专职抗原提呈细 胞；未成熟DC在机体的外周组织中捕获和加工抗原，然后开始向淋巴器官转移， 并渐进式成熟，与此同时DC表面重要的功能分子表达增加，并激活初始T细胞， 引发应答，参与机体多种自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤及一些炎症反应的 病理过程，在机体的抗感染免疫及肿瘤免疫应答过程中起着极其重要的作用，也 是基础与临床研究的热点之一。然而，虽然ABP在免疫系统中的显著调节作用已 被确认，但是却没有关于ABP作用于DC的相关报道。本研究旨在探讨ABP对小鼠 髓系DC细胞株成熟促进、表型改变及功能变化等方面的影响。 方法 采用本教研室保存并传代的C57BL／6小鼠髓系DC2．4细胞株进行实验，复苏 培养细胞，应用MTS法、细胞免疫组化、扫描电镜技术、透射电镜技术、4．氨基 安替比林(4-AAP)比,色法、流式细胞仪检测技术、酶联免疫吸附试验等检测DC表 型、结构和功能的各项指标。 幺士蟹 ；口刁℃ 1、细胞培养：细胞稳定传代培养后，幼稚DC24d、时后趋向成熟。 2、MTS法：1．5×104mg／ml-5mg／ml浓度作用DC较RPMI1640对照组的 DC 24h后明显增殖，且有浓度依赖性，在0．0ling／ml出现峰值。 3、扫描电镜：经ABP刺激后，DC表面突起较正常对照组明显增多，这是 DC趋向成熟的标志之一。 4、透射电镜：经ABP刺激后，DC体内溶酶体的数量明显减少。因为DC 吞噬加工抗原需要溶酶体的参与，所以溶酶体数量的减少说明DC趋向成熟，吞 噬加工抗原的能力减弱。 5、细胞免疫组化：DAB试剂盒染色，苏木素复染后在光学显微镜下观察， 可见对照组DC的吞噬加工辣根过氧化物酶的数量明显比ABP刺激组多，说明 ABP作用组的DC吞噬加工抗原的能力减弱，细胞趋向成熟。 6、4．氨基安替比林(4．AAP)比色法：与RPMI1640组相比，ABP组酸性磷酸 酶活性均下降，差异有统计学意义。 7、ELISA检测IL．12的含量：与RPMI 1640组相比，LPS和ABP作用后的 DC的培养液上清中IL．12的含量明显增高，差异有统计学意义。