作用于电压门控钠通道的蜘蛛毒素的结构和功能的研究.pdf

中英文摘要 中文摘要 huwena huwena l=Ornithoctonus Wang 虎纹捕鸟蛛(Selenocosmia flainana (Wang)])、海南捕鸟蛛(SMcnocosmia raveni)是在我国南方 加]nana(Liang)])和雷氏大疣蛛(Macrothele 发现的具有很强毒性的蜘蛛新种，其粗毒能使昆虫和小型脊椎动物致死。 本项研究采用膜片钳技术在NOL08—15细胞上首先检验了这三种蜘蛛的粗 毒对电压门控钠通道和延迟整流钾通道的影响。结果表明，三种蜘蛛粗毒 对外向延迟整流钾通道没有明显作用，但对TTX敏感型钠通道表现出较强 的浓度依从性抑制效应，半有效抑制浓度(IC。)分别为：3．4、1．8和11．0 mg／L。值得注意的是，三种粗毒抑制钠通道的方式均与其它已知蜘蛛钠通 道毒素不同，都不能影响通道的激活与失活时间，表明在这些蜘蛛粗毒中 极有可能含有未曾报导过的新型钠通道毒索。 通过阳离子交换和反相高效液相色谱柱层析(HPLC)，进一步从海南 捕鸟蛛粗毒中分离获得了一种新的神经毒素，命名为海南捕鸟蛛毒素一v 定了该毒素以及其它三种海南捕鸟蛛毒素(包括海南捕鸟蛛毒素一I (HNTX—IV))对离子通道的影响特征。四种海南捕鸟蛛毒素均是多肽类钠 结果表明四者都属于抑制剂胱氨酸结(ICK)模体蛋白家族。四种HNTX均 TTX敏感型钠通道亚型的选择性不～样。HNTX III—V能完全抑制大鼠背根 nM。 rNa，1．2／p 1和昆虫钠通道para／tipE(外源表达于非洲爪蟾卵母细胞上)， uM。HNTX ICm分别是68．0和4．3 道的稳态失活曲线向超极化方向漂移约lO讯V。同粗毒水平实验结果一样， 中英文搁婪 四种HNTX都不能延缓钠通道的失活时间，也没有漂移电压一电流(I—V) Karsch粗毒) 素BmKI(类。一蝎毒素，来自于东亚钳蝎Buthus加artensi 延缓的失活电流，表明海南捕鸟蛛毒素不是位点3毒素，其影响钠通道的 一步推测HNTX在钠通道上的结合位点是位点l。通过固相化学合成的方法， Lys”和Arg。应该是海南捕鸟蛛毒素结合钠通道的关键残基。 jingzhao)是最近在我国海南省发现的 敬钊缨毛蛛(Cfl2lobraoflys 一蜘蛛新种。通过阳离子交换和／或反相HPLC，我们从其粗毒中得到了两 种丰度较高的组分，并命名为敬钊缨毛蛛毒索～I(JZTX—I)和敬钊缨毛蛛 JZTX—I的分子量为3675．6Da，含有33个氨基酸残基；而JZTX—III的分 子量为3919．4 Da，含有36个残基。两毒素中均包含6个Cys。结合TCEP 部分还原修饰、氨基酸序列测定和多酶酶解分析法等技术，鉴定出这6个 一X-Arg一，且其间隔蛋白区序列只含有5个残基，是目前蜘蛛毒素前体中 道毒素，但对钠通道亲和力与亚型的选择性不一致。JZTX-I是目前首次报 道的。源于蜘蛛粗毒的类a一毒紊，能抑制棉铃虫幼虫神经元细胞钠通道、 大鼠DRG细胞TTX敏感型钠通道和心肌细胞钠通道的快速失活，Ic。分别 M和31．6 为8．86州、0．99 nM，对三种细胞上钠电流的峰值大小都无明 显影响，也不改变通道I—V曲线和稳态失活特征，但能加