杆状病毒用于哺乳动物细胞快速高效表达外源基因的研究.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’() * ! +( *# 年 月 $%% !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 ,-./-01-2 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 杆状病毒用于哺乳动物细胞快速高效表达外源基因的研究 程 通 许辰煜 王颖彬 陈 敏 吴 婷 谢小燕 张 军 夏宁邵 （厦门大学生命科学学院，厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室，厦门 6!%%# ） 摘 要 现已发现杆状病毒可进入某些培养的哺乳动物细胞，这提示可将杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新 型基因转移载体。对杆状病毒转移载体的改造及对哺乳动物细胞的基因转移方式进行了进一步的研究。以绿色 荧光蛋白基因为报告基因，利用G;F3/(3G;F 系统构建了分别含有正向和反向HI’ 启动子表达盒的两种重组杆状病 毒。可观察到 启动子在 细胞中可启动报告基因的表达，但表达效率较低。用重组杆状病毒感染后 细 HI’ ,J ,J 胞的培养上清直接与K-.L$ 细胞作用，以流式细胞术检测基因转移效率及荧光表达强度，发现这两种病毒在相同 的感染复数下对K-.L$ 细胞具有相似的基因转移及表达效率。同时，利用流式细胞术进一步研究了直接使用重组 杆状病毒感染 后 细胞的培养上清对哺乳动物细胞进行基因转移的方法。通过对 细胞的实验结果显 4E ,J K-.L$ 示，将带毒 细胞培养上清（ 5 ）用哺乳动物细胞培养基 倍稀释后， 下孵育靶细胞 （ ,J !*$ M !% N:OP0Q ! 5 R !$S 0( T #%），可达到较高的基因转移及表达效率，同时不会对细胞造成明显损伤。将重组杆状病毒与脂质体和逆转录病毒 这两种系统对K-.L$ 及H’! 细胞的基因转移效率进行了比较，结果发现在同样未经浓缩等特殊处理的条件下重组 杆状病毒对这两种细胞的基因转移效率是最高的。因此可以认为，经过适当改造后的G;F3/(3G;F 重组杆状病毒系 统可作为一种对哺乳动物细胞简便高效的基因转移表达载体。 关键词 昆虫细胞 杆状病毒表达系统，绿色荧光蛋白，哺乳动物细胞，脂质体，重组逆转录病毒 G;F3/(3G;F 3 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） U7! 8 !%%%3%6! $%% %#3%#7!3%5 昆虫细胞 杆状病毒表达系统是一种发展成熟 因作为报告基因，探讨直接使用昆虫细胞分泌的杆 3 的蛋白表达系统。过去认为，杆状病毒有严格的宿 状病毒上清对哺乳动物细胞进行外源基因转移的可 主限制范围，不能感染脊椎动物细胞。近年来的研 行性，并与脂质体和逆转录病毒基因转移系统进行 ［，］ 究发现，杆状病毒可进入某些哺乳动物细胞! $ ，但 了比较，发现杆状病毒上清直接用于基因转移的转 ［］ 其进入细胞后并不发生复制和基因转录 。在杆状 移效率和表达效率均较理