固定化地衣芽孢杆菌胞外脂肪酶的制备.pdfVIP

浙江理工大学学报(自然科学版)，第 33卷，第5期，2015年 9月 JournalofZhejiangSci—TechUniversity(NaturalSciences) Vo1．33，No．5，Sept．2015 文章编号：1673—3851(2015)05—0694—05 固定化地衣芽孢杆菌胞外脂肪酶的制备 吴程雨，叶 飘，杨孝婷，徐叶倩 ，巩孝磊 ，唐琦清 ，赵辅昆，潘建义，陈 玮 (浙2．r-~工大学生命科学学院，杭州 310018) 摘 要：脂肪酶是一类重要的水解酶，广泛应用于食品、医药、化工等领域。脂肪酶通过固定化可以提高酶的使 用效率。文章采用戊二醛共价连接法将来源于地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)的胞外脂肪酶 固定于氨基型 载体 zH—HA之上，将 1g载体置入 10mL酶液中反应3h后固定化酶活力达到最高为6OU／g湿载体。经固定化后 该酶的温度稳定性得到显著提升，当反应温度为45℃时最高酶活力达到220U／g湿载体。同时，固定化使酶在碱性 条件下的稳定性得到提高，最适反应pH值为1O。通过 自制柱式反应器考察该酶工作稳定性，经过15批连续水解反 应，固定化脂肪酶仍保持 9O 的活力，展现 出良好的稳定性。 关键词：地衣芽孢杆菌；脂肪酶；固定化；ZH—HA 中图分类号：Q786 文献标志码：A 属于a／J3水解酶超家族 ，该酶为胞外脂肪酶，分 0 引 言 子量约为2OkD，易于通过细菌发酵生产，在碱性的 脂肪酶 (三酰基甘油酯水解酶，EC3．1．1． 条件下 (pH9．5)催化活力较高，具有一定的工业 3)_】]，属于水解酶类家族 ，除了水解作用，脂肪酶还 应用价值，但是该酶也存在热稳定性较低的缺点，制 能催化其它多种生物转化反应，如有机合成反应、酸 约其生产应用 。 解、氨解、酯化反应、酯交换反应及酯基转移反应 固定化是脂肪酶应用于工业生产的重要途 等[。]。脂肪酶在 自然界中广泛存在l4]，不仅有参与 径[1，固定化技术可提高酶的稳定性，并能实现酶 新陈代谢的重要生理作用，而且有很大的工业价值， 的长期反复使用，从而降低生产成本。此外，固定化 包括一些特殊有机物的合成，脂肪和油类的水解，食 载体的基团会影响反应体系的微环境，从而改变游 品工业发展 中香料的改进 以及化学分析等_5]。此 离酶的一些特性。有多种方法可以进行酶 的固定 外，脂肪酶还可以催化动、植物油脂发生酯交换反应 化，其中吸附法是最常见的方法之一，该法具有操作 得到脂肪酸 甲酯或 乙酯类物质，该类物质是生物柴 简单，条件温柔，活力回收率高等特点，然而吸附法 油的重要组成部分，它不含芳香烃，对环境友好，与 往往因酶与载体的结合力较弱从而使得酶容易脱 普通燃油相比，极大降低污染物的排放l6喝]，且生物柴 落。共价法固定化是另一种常见的方法，可通过共 油属于可再生能源，并且还具有润滑性能良好、燃烧 价键将酶牢固地连接在载体之上。在脂肪酶固定化 充分、便于运输及使用安全等性能_9 。同时，酶法 的研究中，溴化氰活化多糖载体法、叠氮基团法、环 合成生物柴油，还能进一步合成其他一些高附加值的 氧基团法等已被使用，然而这些方法都含有剧毒物 产品。因此 ，脂肪酶在工业领域有很大的应用潜力 。 质或者反应时间过长的等缺点。ZH—HA是一种氨 地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)脂肪酶 基型载体，可以快速和醛基形成席夫碱 (Schiffbase) 收稿 日期：2o14 11—21 基金项 目：国家 自然科学基金项 目；浙江省高校生物学重中之重(一级)学科开放基金项 目(2012DII)；浙江理]大学科研启动 基金项 目Y) 作者简介 ：吴程雨