乳酸菌复合系sc-2的筛选及其秸秆发酵过程中的协同作用机理.pdf

摘要 农作物秸秆是一种重要的生物质资源。近几年来。由于农作物产量的大幅度提高和农民薪材 结构的改变，越来越多的秸秆成为废弃物，既浪费了资源又污染了环境。因此，解决我国剩余秸 秆问题对资源利用和治理地球环境污染极其重要。目前，对秸秆的综合利用大致有发展秸秆能源、 秸秆饲料，秸秆肥料等方面。秸秆作为反刍动物的饲料是解决秸秆污染问题和给人类增加蛋白营 养来源的重要途径，也符合我国畜牧业长远发展目标。但是，由于秸秆养分低，适口性差，消化 率低，因而如何提高秸秆的适口性，提高饲用价值是解决我国秸秆公害、提高有机物利用率的一 大热点。通过微生物发酵是提高秸秆适口性和饲用价值的重要途径之一．关于饲料化发酵，当前 有接种单菌或简单人工混合接种等多种报道，但结果都不甚理想。 本研究旨在获得一组在不灭菌条件下能够抵制杂菌污染，稳定地，高效地促进作物秸秆饲料 化发酵的微生物群体，摆脱传统的纯培养技术，以自然发酵物为菌源，通过。外淘汰法”长期定 向限制性培养手段构建出一组pH下降迅速、乳酸产量高、对环境变化耐性强的乳酸菌复合系； 结合分子生物学手段分析其组成多样性，将其接种到作物秸秆验证应片}效果，并纯化分离其中的 主要菌株研究其性质，进一步用定量PCR技术追踪了主要菌株在接种复合系的发酵体系中的动 态。得出的结果如下： 用M骼s培养基通过连续继代培养，得到一组乳酸菌复合系，它能在12h内将培养液的pH 降至3．8，发酵产物主要为乳酸和乙酸，乳酸中以L-(+)乳酸居多，约占总乳酸生成量的“％， 乳酸与乙酸的产生比率为4．63。通过传统平板分离和FISH、PCR．DGGE、克隆文库分析等现代 菌)(76．3％)，Lactobacillus paracasei(类干 planta,∞n(植物乳杆菌)(203％)，Lactobacillus 酪乳杆菌)(3．4％)均为乳酸杆菌属(Lactobacillu)． 将该复合系分别接种到玉米，水稻、小麦秸秆发酵，结果表明，接种在玉米秸秆中，发酵30 d后，接种处理比对照pH降低7．36％，乳酸含量提高了174．79％；接种在稻秆中，接种处理比 接种该复合系后，复合系中的主要组成菌L paracasei迅速成为发 p妇Ⅲ嘧nM，L．，d，Il∞肋”和L 酵料中的优势菌群，明显抑制了未接种对照中可见的多种杂菌。发酵品质得到明显改善。 为了进一步研究该复合系在接种发酵过程中的作用机制，将复合系、复合系的主要分离单菌 株及分离单菌株的人工混合分别接种到稻秆发酵，用定量PCR方法监测主要组成菌Lplantarum， L fermentum和厶paracasei在各处理中的消长动态，得出单纯接种分离单菌株Lfermenrum 菌株生长较快，在发酵前期逐渐增殖，后期逐渐衰退，而Lparacasei菌株生长较慢，在发酵后 期占优势，保证了发酵过程中的乳酸菌茸。 关键词：秸秆，发酵饲料，乳酸菌复合系，PCR．DGGE，定量PCR Abstract Thc slrawsarethe bioresourco．Inrecent theincreaseIn crop imlortant years,with cropproduction the havebeAⅪmewastes．Asa gtraw$ and of andnwqesffaws result,crop popularizationHqtudgas．more 脚ufc黜arewastedandserious is totreatwiththe∞ poHufionoocum．Therefore,itquikinllxntant strawsfor theenvironmentaland n唧∞鲷哪强Atthe remaini