农杆菌真空渗透化棉花的研究及转susy基因棉花后代的功能验证.pdfVIP

中文摘要 棉纤维是棉花所特有的一种表皮细胞，是从胚珠表皮细胞分化而来的单细胞结构。已知 棉花中的蔗糖合成酶基因Su对与棉花珠被表皮细胞分化为纤维细胞有关，对棉纤维细胞分 化数目、伸长速度和次生壁加厚等都有影响。本研究以SuSy基因为供体，棉花为受体材料， 就农杆菌真空渗透转化法的关键因子进行研究，优化该转化方法的技术体系；并对花粉管通 道法得到的转SuSy基因后代的糖含量变化和农艺性状进行研究，确定其在转基因棉花提高 纤维品质方面的功能和作用。 农杆菌真空渗透法影响因素进行研究，结果表明，花粉在45％蔗糖浓度的花粉悬浮液中 能维持适当渗透压，破损率最低；在一80pa压力下，菌液OD600值在0．6～1．2范围内，真空 渗入时间在15-25rain内，能维持较低花粉破损率及较高瞬间转化率；对渗透的花粉进行 GUS瞬时检测，花粉部分变成蓝色，并观察到花粉管的伸长，说明抽真空后部分花粉仍有活 力。通过本实验的研究，优化了该转化法的技术体系。利用该方法将SuSy基因转入新陆早 19号中，转化后代经卡那霉素抗性筛选和PCR检测，得到18株阳性植株，转化率为0．3％。 通过花粉管通道法得到的转Su跏基因棉花中的整合和表达进行筛选鉴定，分子检测结 果说明，得到的转SuSy基因后代为单拷贝的，已稳定遗传，该基因在叶片和纤维中均有不 同程度的表达。比较转SuSy基因植株Ts代株系与受体新陆早13号在形态性状、产量性状 和品质性状的差异，表明：S￡J印基因的导入对棉花各农艺性状有不同程度的影响，各性状 变异系数增加，其中果枝数和皮棉产量差异显著；植株叶片和茎秆的表皮茸毛密集，数量 比对照显著增加5倍；转基因棉纤维蔗糖含量降低，棉纤维可溶性糖及葡萄糖含量维持较 高水平，有利于纤维素的合成和沉积；纤维长度和强度略有增加，马克隆值降低，品质得 到改善。通过本实验确定了SuSy基因对棉花纤维品质的影响，为利用生物技术提高棉纤维 品质奠定理论基础，并为棉花优质育种提供了优良材料。 关键词：农杆菌真空渗透法，蔗糖合成酶基因印跏，基因表达，农艺性状，品质性状 Abstract CottoniSthemost textileasaresultofiIs celluclose-enrichedmature improtantcrop long fibers．These hairsinitiateatanthesisfromtheolvule results single-celled epidermis．These the demonstratesthat a roleintheinitiationand orof SuSyplaysrate·limiting elongation influentialedwall had fibers，and secondary speed．So，thisstudy single-celled thickening cotton vacuuminfiltrationand SuSytransgenicthroughAgrobacterium—mediated developed tube studiedtheinfluenceto metabolicleveland traits．111is pollenpasway,we plant agronomic work functionboth andcottonfiberof in showedthe yieldimprovement SuSygenetransgenic