培养条件对串珠刀菌提取物抑藻活性的影响.pdfVIP

摘 要 随着全球经济的快速发展，环境污染问题日益严重。水体富营养化是影响水质的 重要因素之一，蓝绿藻的阶段性暴发是水体富营养化最常见的现象。藻类的暴发生长 不仅消耗水中大量的溶解氧，一些藻类还会产生藻毒素，进而影响水中其它生物的生 存。因此，富营养化水体中藻类控制技术的研究与开发受到广泛关注。本文以从富营 养化水样中分离的串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)为研究对象，以蛋白核小球藻 (Chlorella pyrenoidosa)为靶标，研究了培养条件对串珠镰刀菌提取物抑藻活性的影 响，提出了优化的串珠镰刀菌发酵条件，并评价了串珠镰刀菌提取物抑制斜生栅藻 (Scenedesmus obliquus) 的效果。 主要研究结果如下： 1. 采用划线法，从水体中分离、纯化得到 4 种真菌，即 SA、SB、SC 及串珠镰 刀菌(Fusarium moniliforme 经中国科学院微生物研究所鉴定) 。以乙酸乙酯为提取溶 剂，匀浆法制备 4 种真菌提取物。生物测定结果表明，在 0.25~1.0g/L 的浓度下，4 种真菌提取物对蛋白核小球藻的抑制率分别为，SA ：-69.38%~11.23% ，SB ： -23.84%~-17.95%，SC：22.33%~-1.35%，串珠镰刀菌：42.04%~87.09%。 2. 通过单因素筛选试验，筛选出培养串珠镰刀菌发酵液的最优培养温度为 22 ℃， 其对蛋白核小球藻生长的抑藻活性为：92.18% ，提取物质量为：0.09g/L ；筛选出培 养串珠镰刀菌发酵液的最优 pH 值为 8 ，其对蛋白核小球藻生长的抑藻活性为： 82.89%，提取物质量为：0.12g/L 。通过正交设计试验，筛选出培养串珠镰刀菌发酵 液的最优培养基组合为：麦芽糖(2%)、蛋白胨(2%)和 CaCl + MgSO (0.1%+0.05%)， 2 4 其对蛋白核小球藻生长的抑藻活性为：88.71%，提取物质量为：0.28g/300mL ；筛选 出培养串珠镰刀菌发酵液的最优发酵条件组合为：接种量为 13 个菌饼/瓶、装液量为 160mL/250 mL、振速为 140r/min，其对蛋白核小球藻生长的抑藻活性为：87.15%， 提取物质量为：0.20g/300mL 。 3. 通过正交设计试验筛选出串珠镰刀菌发酵液中提取物最优提取工艺为：用发 酵液：提取剂(V:V)=2:1 的乙酸乙酯重复提取 4 次，其对蛋白核小球藻生长的抑藻活 性为：85.08 %，提取物质量为：0.14g/300mL 。 4. 剂量效应研究结果表明，串珠镰刀菌提取物对供试藻细胞生长抑制存在显著 的剂量效应关系，对蛋白核小球藻、斜生栅藻及其混合藻液的EC50 分别为 0.33 g/L、 0.34g/L 和 0.42 g/L 。 I 5. 通过环境扫描电镜观察，经过串珠镰刀菌提取物溶液处理的藻细胞形态的变 化为：形态模糊→细胞壁破裂→细胞渐溶→彻底分解，未经处理的藻细胞则正常生长， 无明显变化。 本文结果为串珠镰刀菌中具有抑藻活性的次生代谢产物的分离、鉴定提供了依 据，对于进一步开发生物源除藻剂具有重要的参考价值。 关键词: 串珠镰刀菌 蛋白核小球藻 抑藻活性 培养条件 提取工艺