水稻RNA纯化方法的比较和改进.pdfVIP

中国农业科技导报 , 2 008, 10 ( S1) : 111 - 115 Jou rna l of A gricu ltu ral Sc ience and Technology 水稻 RNA 纯化方法的比较和改进 刘 　凌 , 　谢家建 , 　王锡锋 , 　彭于发 (中国农业科学院植物保护研究所 , 植物病虫害生物学国家重点实验室 , 北京 100094 ) 摘 　要 :本实验利用 TR IZOL 试剂提取水稻苗期叶片总 RNA ,对三种常用的 RNA 纯化方法和改进的纯化方法 进行了比较 。通过凝胶 电泳 、紫外分光光度 法和 RT2PCR 法检 测提取的 RNA 样 品的品质 ,结果表明 ,应 用改 进的 RNA 纯化方法可有效去除水稻 RNA 中的 DNA 污染 , 电泳条带清 晰无降解 ; OD2 60 /OD2 80 为 1. 9 1～ 1. 98, 具有较高的纯度 ;改 良方法纯化的 RNA 逆转录为 cDNA ,作为 PCR 扩增的模板 , 以不同的循环数进行扩增 ,在 反应适宜循环数内检测不到 DNA 片段污染 ,说明用 改进方法提取 的 RNA , 其质量 和纯度 可以满 足下一步分 子生物学研究的需要 。 关键词 : RNA ; DNA 污染 ;提取方法 中图分类号 : Q943. 2　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 100 820864 ( 200 8) S120 111205 C om par ison an d Im p r ovem en t of RNA Pu r if ica t ion M ethod s in R ice L IU L ing, X IE J ia2j ian , WAN G X i2feng, PEN G Yu 2fa ( State Key Laboratory fo r iology of P lan t D isea se s and Insect Pe sts, Institu te of P lant P rotection, C hinese A c adem y of A gr icul tu ral Science s, eij ing 100094, Ch ina) Ab stra ct : To ta l RNA w as extracted from rice leave s u sin g TR IZOL regen t. Three common ly u sed RNA p u rifica tion me thod s and an mi p roved m ethod we re comp ared in th i s exp erimen t. The quality of total RNA w as an alyzed through gel e lectrop hore si s, UV sp ectrop hotome try an d R T2PCR. The RNA p u rified by th e imp roved m ethod gave clear band s o f rRNA in th e electrop hore si s w ithou t DNA con tam in at ion an d d egrad at ion. OD2 60 /OD2 80 va lue wa s from 1. 91 to 1. 9 8. RNA p u rified b y the imp roved m ethod wa s u sed for R T2PCR an d none band of DNA con tam in at ion cou ld be ob served in agaro se gel. These re su lts demon stra ted th at the quality and p urity o f