潜力工业催化剂——白地霉脂肪酶.pdfVIP

维普资讯 潜力工业催化剂—— 白地霉脂肪酶 阎金勇 ，闫云君 (华 中科技大学生命科学与技术学院教育部分子生物物理重点实验室 ，湖北武汉 ，430074) 摘 要 白地霉脂肪酶 因具有独特 的底物特异性 ，在油脂改性等领域有着广泛应用 。文 中概述 了白地霉脂肪酶 的发酵生产、分离纯化、克隆与表达、底物特异性分子机理及应用等 ，并展望其未来发展方向，为该2L业催化剂 的 研发与广泛应用提供参考。 关键词 白地霉脂肪酶，分离纯化 ，表达 ，底物特异性，应用 白地霉 (Geotrichum candidum)是一种菌落形 性差异 ¨4]。白地霉脂肪酶的发酵生产培养基种类较 态界于典型的酵母和丝状真菌之间的常见真菌，属于 多。白地霉可在 由蛋 白胨和 K HPO 组成 的蛋 白 半知菌亚门，因具有对培养基营养要求低 、适应性强、 胨一盐基本培养基 中分泌胞外脂肪酶。加入橄榄油和 生长快、宜于工业化生产等特点 ，成为一种极具发展 Tween8O可提高胞外酶的产量 。在加有橄榄油的基 潜力的工业微生物_】]。脂肪酶 (EC3．1．1．3，甘油三 本培养基 的发酵初期 ，附着酶活力 比胞外酶高，胞外 酰酯水解酶)是一类水解和合成长链脂肪酸甘油酯的 酶分泌延迟。而在基本培养基和加有 Tween8O的 生物催化剂，在油脂加工 、洗涤 、食品加工、医药、化妆 基本培养基的整个发酵过程中，附着酶活力 比胞外酶 业、皮革加工、饲料、造纸、有机合成、精细化工以及生 低_6]。在 白地霉脂肪酶的发酵生产 中，作为碳源和诱 物能源等诸多领域有着广泛 的应用。应用具备高度 导物的油脂起着至关重要的作用 。长链脂肪酸 (酯) 位置特异性 、底物特异性和立体特异性的脂肪酶开发 能诱导脂肪酶的分泌；而中链和短链脂肪酸 (酯)则不 绿色生物催化工艺 ，生产传统化学方法不能合成的产 能。脂肪酶产量 随着诱导物碳链长度的增加而增加 ， 品，是 生物催 化领 域 的热 点 ]。 白地 霉脂 肪酶 长链不饱和脂肪酸酯 的诱导效果最好_7]。Loo等 [8 (Geotrichumcandidum lipase，GCL)对长链不饱和 报道G．candidumIMI387428在由蛋白胨、葡萄糖、 脂肪酸具有高度底物特异性而成为一种优 良的工业 酵母膏、硫酸铵 、磷酸盐缓冲液 ，棕榈油酸诱导物组成 催化剂。在选择性水解鱼油富集高营养价值的多不 的培养基 中产生 22．59U／mL的附着酶和 0．2mL 饱和脂肪酸 (如二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸)、选 的胞外酶。该附着酶表现出优 良的油酸水解特异性。 择性酯化分离功能性共轭亚油酸异构体等领域_3，其 Burkert等 [9运用 响应面法优化 白地霉产脂肪酶条 应用潜力巨大。目前 ，关于 白地霉脂肪酶的研究多见 件 ，发现 以大豆油作为碳源 ，NH NO。、玉米浆为复合 于国外报道 ，国内则鲜见报道。本文就 白地霉脂肪酶 氮源时 ，发酵液酶活力 2OU／mL；改用橄榄油作为碳 的发酵生产 、分离纯化、基因克 隆与表达及应用研究 源 ，酶活力则降至 17U／mI。 作全面的综述 。 2 分 离纯化 1 发酵生产 大多数微生物脂肪酶在 3O～4Oku，GCL则较 大 ，约为 6Oku。与胆碱酯酶 (cholinesterase)结构类 白地霉脂肪酶 的早期研究关于底物特异性不一 似 ，GCL具有 a／I3水解酶 的折叠结