珍稀濒危植物香果树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生.pdfVIP

维普资讯 植物学通报 ChineseBulletinofBotany 2008，25(3)：337—343，~NtW／．chinbullbotany．com - 组织培养简讯- 珍稀濒危植物香果树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生 熊丹 ’，陈发菊’，，梁宏伟 ’，王玉兵’ ’三峡大学生物技术研究 中心，湖北省天然产物研究与利用重点实验室，宜 昌443002 湖北 民族学院湖北省生物资源保护与利用重点实验室，恩施445000 摘要 以香果树(Emmenopteryshenry1)未成熟种子为试材，探讨不同的接种量、基本培养基、糖浓度及植物生长调节物质 等对体细胞胚胎生长的影响，建立稳定的香果树胚性细胞悬浮培养与植株再生体系。结果表明：悬浮培养条件下，最适接种量 为2％(鲜重)：较适合的基本培养基为MS；蔗糖浓度为1％时容易使球形胚聚合体愈伤化，浓度为3％和6％适合球形胚聚合体增 殖。浓度为9％则容易使球形胚聚合体褐化：添加O．5mg·L_。6一BA和0．5mg-L NAA的MS液体培养基，当初始蔗糖浓度为 3％。然后逐步提高到6％则有利于香果树各个发育阶段的同步化：子叶胚转到不含任何植物生长调节物质的MS固体培养基中 可以长成正常植株。 关键词 胚性悬浮细胞，香果树，植株再生，体细胞胚胎发生 熊丹，陈发菊，粱宏伟，王玉兵 (2008)．珍稀濒危植物香果树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生．植物学通报 25，337—343． 植物细胞悬浮培养(plantcellsuspensionculture) 体细胞胚胎，但对于细胞悬浮培养的相关影响因子尚未 在现代生物学研究中有着广泛的应用。植物悬浮细胞 有系统的研究报道 。本文以香果树未成熟种子为外植 系可以用来分离原生质，制造人工种子，筛选突变体，生 体，探讨不同的接种量、基本培养基、糖浓度及生长 产次生代谢物质以及进行植物细胞代谢生理和生化特征 调节物质等对体细胞胚胎生长的影响，建立了稳定的细 等方面 的研究。 胞悬浮培养与植株再生体系，以期为香果树的细胞工程 香果树(Emmenopteryshenry1)，别名丁木，为茜草 和基因工程研究奠定基础。 科(Rubiaceae)香果树属高大乔木，我国特有单种属植 物，第四纪冰川幸存的古老孑遗树种。香果树的分布零 1 材料与方法 散，种群数量不多，自然条件下种子萌发力极低，天然更 新能力差，现存数量有限，处于濒危状态，已被列为国家 香果树(EmmenopteryshenryiOliv)幼嫩果实于2004年 二级重点保护植物和林业部公布的国家珍贵树种。该 8月采 自神农架 自然保护区。取香果树幼嫩果实(果龄 树种在我国主要分布在江西、福建、湖南和湖北等地 30天左右)在洗涤液中用软刷刷洗，然后用洗涤液浸泡 海拔400—1400m的土壤湿润肥沃的山坡和谷地。香 30分钟，自来水冲洗2小时，在超净工作台上用75％乙 果树材质洁白细密，纹理通直，是一种优 良用材树种 。 醇灭菌1分钟，0．1％HgCI2消毒15分钟，无菌水清洗5 它树姿优美，花色艳丽，也是很好的观赏植物(傅立国和 次。用手术刀纵向切开果皮，挑出未成熟种子备用。 金鉴明，1992)。迄今为止，国内外通过体细胞胚发生途 1．1 胚性愈伤组织的诱导 径来大量繁殖香果树的报道很少，仅有姬飞腾等(2005) 利用香果树叶片为外植体，通过固体和悬浮培养诱导出 将未成熟种子接种到附加2．0mg．L 6一BA的MS固体 收稿 日期：2007．03-13：接受 日期：2007·11-29 基金项 目：湖北省生物资源保护与利用重点实验室开放基金(No．2007010)、国家林业局 自然保护区研究中心项 I~(No．460·8101)和宜 昌市科技局重点攻关项 目(No．A06209) ’通讯作者。E·mail：chenfj616@163．com