六种牛源致病性菌多重pcr检测方法的建立.pdf

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2016-02-20 发布于贵州
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六种牛源致病性菌多重pcr检测方法的建立

■|● 目录摘要………………………………．……………………………………………………………………………………．．I 英文摘要………………………………………………………………………………………………IlI l弓I言…………………………………………………………………．………………………………………………．．1 1．1黏膜一病原体入侵的主要途径………………………………………………………．1 1．2消化道与呼吸道细菌性疾病…………………………………………………………l 1．2．1消化道细菌性疾病………………………………………………………………．1 1．2．2呼吸道细菌性疾病………………………………………………………………．2 1．3细菌性疾病的防治手段…………………………………………………………………。4 1．4疫病的诊断方法………………………………………………………………………5 1．4．1传统的检测方法…………………………………………………………………．5 1．4．2免疫学检测方法……………………………………………………………………6 1．4．3分子生物学检测方法……………………………………………………………。6 1．4．4生物传感技术…………………………………………………………………………8 1．4．5色谱技术……………………………………………………………………………．8 1．4．6红外分光分析技术………………………………………………………………………．8 1．5研究的目的与意义………………………………………………………………………………9 2材料与方法……………………………………………“………………………………．10 2．1试验材料…………………………………………………………………………………10 2．1。l病料来源……………………………………………………………………………．10 2．1．2菌株与载体…………………………………………………………………………．10 2．1．3主要试剂………………………………………………………………………………lO 2．1．4主要设备…………………………………………………………………………………10 2．1．5引物……………………………………………………………………………………………………。ll 2．1．6试验动物…………………………………………………………………………12 2 2．2试验方法…………………………………………………………………………………．．1 2．2．1多重PCR检测方法的建立……………………………………………………．12 2．2．2多重PCR扩增产物的克隆及序列分析…………………………………………12 2．2．3特异性试验………………………………………………………………………．14 2．2．4敏感性试验………………………………………………………………………………．14 2．2．5重复性试验和稳定性试验………………………………………………………．15 2．2．6人工模拟小鼠样本的多重PCR检测………………………………………………15 2．2．7人工感染临床样本的多重PCR检测……………………………………………。15 3结果与分析………………．．．………………………………………………………………………………。16 3．1消化道疾病细菌多重PCR方法的建立……………………………………………………．16 3．1．1多重PCR最佳反应体系及条件的确定…………………………………………。16 I 东北农业大学农学硕十学位论文 3．1．2多重PCR扩增产物的克隆及序列分析…………………………………………．20 3．1．3特异性试验………………………………………………………………………22 3．1．4敏感性试验…