内蒙古绒山羊bp-2基因dna序列的克隆与荧光原位杂交定位.pdfVIP

摘 要 本研究从内蒙古绒山羊血中提取基因组DNA，PCR扩增绒山羊的BMP-2基因片段， 连接到pGM-T载体、转化，筛选鉴定阳性克隆提取质粒进行测序，和GenBank数据库 进行比对，对它们的核苷酸和氨基酸序列进行生物信息学分析，并将克隆所得质粒标 记探针，利用FISH技术确定BMP一2在染色体上的位置。试验结果充实了BMP一2基因图 谱，为进一步了解BMP-2基因信息对绒山羊的选育提供了理论支持。结果如下： 1．克隆了内蒙古绒山羊BMP-2基因的外显子，外显子长1751bp。对绒山羊、绵羊、牛、 猪、人和猴子的相应序列做同源性比较分析和进化树分析，所得结果与物种间的进 化关系相符。 2．绒山羊、绵羊和牛的BMP-2基因第三外显子的这部分序列，序列间的变异完全是碱 基的替换。其中绒山羊和绵羊序列之间，发生了3个碱基替换，相似率高达99．6％， 而牛与绒山羊碱基替换数目为13个，相似率为98．1％，比绒山羊与绵羊的相似率要 ‘低，比较绒山羊、绵羊和牛第三外显子的氨基酸序列，有5处不同，其中与绵羊只 有1变异，牛有4处，同源性非常高，可见，绒山羊、绵羊和牛之间的碱基突变绝 大多数为同义突变，说明BMP-2基因保守性很强。 3．将克隆得到的绒山羊BMP-2基因片段质粒，根据试剂盒说明标记为探针，利用荧光 原位杂交方法定位于染色体13q15。 关键词：绒山羊；BMP-2：克隆；荧光原位杂交 in of and of Fluorescencesitu CloningMappingby Hybridization BMP一2 fromInner Cashmere gene Mongolia goat Abstract Inthis DNAwereextractedfrombloodinCashmere study,thegenome goat．砀e were wereobtainedPCRandclonedinto 8一Tvector．111eclones sequence by pGMl positive BMP一2 we the of fragmentsamong sequenced．Thencomparedsequences gene goats，sheep andotheranimalsthathavebeensubmittedtoGeneBank．111emethodofbioinformatics wasusedto ofboththeirnucleotideandaminoacid ofCashmere aligment sequence gOat． wemadethe withDIG the ofCashmere Furthermore probe usingcloningproduct goat,for BMP一2inCashmereofCashmerefluorescenceInsitu the of goatby hybfition． studyingmap