乙型脑炎病毒pm-e基因的克隆、表达及prm-e基因、e基因dna免疫的研究.pdf

摘要 乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus，JEV)是引起母猪繁殖障碍的主要病因 之一，给养猪业造成了巨大的经济损失，同时乙型脑炎是一种人畜共患病，是人类中 枢系统最常见的虫媒病之一。因此，建立一种安全、简便、经济的制备乙脑诊断抗原 的方法，寻求稳定、安全、新型的乙脑基因工程疫苗已经成为当今JEV防治的主要 研究方向。 特异性引物，采用RT-PCR技术人工扩增出了JEV 感受态细胞，得到的转化子经分子量比较和酶切分析筛选阳性克隆。结果表明，得到 基因克隆到PET32a(+)载体上，得到的转化子经酶切分析，筛选出符合阅读框的重组 原奠定了基础。 分别将溶于50／．*L灭菌PBS溶液的不同免疫原肌注于不同组鼠的左后肢，具体包括 pcDNA．prME，pcDNA．E，pcDNA3．1各50*,g，单纯PBS509L，共免疫2次，问隔2 周。二次免疫两周后，各试验组小鼠(5／5)健康存活。分别采集各组小鼠的血，并 重组质粒对小鼠进行肌肉注射可以产生中和抗体，pcDNA．prME所致的中和滴度略高 于pcDNA．E。目前针对黄病毒的疫苗大多包含包膜E蛋白的中和抗原表位，而prM 疫小鼠，对比其免疫效果，为JEV核酸疫苗的研发提供了一些资料，创造了一定的 条件。 关键词：乙型脑炎病毒；prM—E基因；E基因；原核表达；DNA免疫 and ofthe Gene VirusandDNA CloningExpressionprM-EofJapaneseEncephalitis Immunizationof GeneandEGene prM-E Long Author：Cheng Runde Supervisor：ProLYang Medicine Veterinary Specialty：Preventive Abstract wasthemaincausesofinfectious failurein virus swine， Japaneseencephalitis reproductive transmittedtohumans anditWas diseases．Meanwhile，JEVWas important economically infected andcausedacuteviral and disease by mosquitoes encephaliticneurologic manifestationsthatwasaserious health forhumans．Therefo佗． public problem a andeconomical of JEV establishingsecure，simple techniqueproducingdiagnosis Was underthesituation．Andnowithadbeenamain trendofJEV antigenimpe