乳酸乳球菌up基因缺陷互补型质粒载体系统的构建及其缺失菌生物学特性研究.pdf

目 录 目 录 摘要…………………………………………………………………………………………………………………………………………I 英文摘要………………………………………………………………………………………………．．III 1前言……………………………………………………………………………………………………l 1．1研究的目的和意义………………………………………………………………………………．1 1．2乳酸菌的益生作用及其在基因工程中的应用…………………………………………………．1 1．2．1乳酸菌的益生性作用…………………………………………………………………………2 1．2．2基因工程乳酸菌的应用………………………………………………………………………2 1．213基因工程乳酸乳球菌的应用…………………………………………………………………3 1．3乳酸菌食品级表达系统的研究进展……………………………………………………………．4 1．3．1食品级选择标记研究进展…………………………………………………………………．．4 1．3．2乳酸菌基因组整合系统的研究进展…………………………………………………………7 1．4基因工程(转基因)乳酸菌的安全性评价……………………………………………………10 1．4．1基因工程(转基因)乳酸菌安全性评价的必要性………………………………………．10 1．4．2细菌转录组测序的研究进展………………………………………………………………．1l 2材料与方法…………………………………………………………………………………………．．13 2．1材料……………………………………………………………………………………………………………………………一13 2．1．1载体质粒和菌株……………………………………………………………………………．13 2．1．2主要生物化学试剂…………………………………………………………………………．13 2．1．3引物合成与测序……………………………………………………………………………一13 2．1．4主要仪器设备………………………………………………………………………………．13 2．2试验方法…………………………………………………………………………………………14 2．2．2 lactisMGl363中的温度敏感性试验………………………18 pGBWVHC32-upp载体在L 2．2．3基因打靶整合型载体的构建………………………………………………………………．19 2．2．4缺失upp基因L．1actisMGl363的构建……………………………………………………3l MGl363的生物学特性分析………………………………………33 2．2．5缺失upp基因L．1actis 2．2．6 Upp基因缺陷互补型质粒载体系统的构建………………………………………………一36 3结果………………………………………………………………………………………………………………………．…………．．40 3．1．1 upp基因的扩增和测序结果…………………………………………………………………．40 3．1．3 3．2 万方数据 东北农业大学农学博士学位论文 3．3基因打靶整合型载体的构建结果………………………………………………………………42 3．3．1Upp基因两侧同源臂基因扩增结果…………………………………………………………42 3．3．3 3．3．6 3．4．1缺失upp基因的L．1actisMGl363菌株的PCR鉴定结果………………………………．．50 lactis 3．4．2缺失upp基因的LMGl363菌株中的质粒残留鉴定结果…………………………52 3．4．3缺失upp基因的L．1actis MGl363菌株upp基因区域的测序结果………………………52 3．5缺失upp基因的L．1actisMGl363菌株的生