农杆菌介导犁苞藜nhx基因转化苜蓿影响因素的研究.pdf

摘 要 本试验以子叶为外植体研究了2个苜蓿品种(新牧1号杂花苜蓿、新疆大叶紫花苜蓿)的组织 培养程序，建立了苜蓿子叶植株再生体系。利用农杆菌介导法，将耐盐基因犁苞滨藜朋zr转入苜蓿 中，初步优化了农杆菌转化的方法。研究结果如下： (1)苜蓿子叶高效再生体系的建立 蓿的绿芽分化率为38．4％，成苗率为19．3％；新疆大叶紫花苜蓿的绿芽分化率为43．3％，成苗率为 叶紫花莒蓿的生根率为62．6％，移栽成活率为74．2％。 (2)农杆菌介导犁苞滨藜Mzr的苜蓿遗传转化体系 在愈伤组织诱导阶段加入卡那霉素对愈伤组织的再生有抑制作用，延迟15天进行抗性愈伤组织 的筛选，可提高转化效率。本文以浸染后外植体的抗性愈伤组织率和抗性体胚形成率为指标建立了 有卡那抗性的子叶愈伤组织系，在K∞lOmg几下筛选出抗性芽：对所获得的抗性芽进行PCR检测， 结果表明犁苞滨藜MⅨ基因整合到了苜蓿基因组中。 关键词；苜蓿，农杆菌，转基因，犁苞滨藜，J堀r基因 II Abstract oftwo No．1锄d肘毫咖唧删fv口 砸ss∞culturetecllIliqueaJ脚faⅧ{et{cs(舭qgD聊翻．“xi啪u tis5ue from es诅blish酣regeneration c删edon-derived唧1扑协锄d Daye)w觞res龇hed L．cv．xinJi柚g tl忙矗)undationof foralfalfatissuecultIIre， of regenerationsy咖m alfalfa∞哆ledon．on cu№佗钳stem intoalfalfa mesalmle渤ce by爿即蚰吮一堋。 gene彳呐幽H叫咖∞魄印MⅨw∞n郴fer托d tra惦foml砒i∞．The∞su№a他邪follo、vs： medi砷ed tissueculture w嚣es协blishcd· (1)Regene阳畸on systcm call惜住tio ofinductionculture：Ms+2，4．D2mg·L-1+KTo，5m譬L．1，the of肘瑚c口go mcd．um ①The 97·5％fespectiveIy； 伽忉．cv．xi姗uNo．1锄d蚴蜘阳，加L“XillJiaIlgDaycw啪98．3％柚d o．5 o．1 shoo乜 cult哦：Ms+6-BA mg‘L．1，tIle鲈een di腩佗ntiatioII mg‘一十NAA medi啪of ②The we∞38·锄锄d19·3％ No·1 ratio