农杆菌介导的紫苜蓿badh基因高效转化体系的优化和转基因植株的检测.pdfVIP

主要英文缩略词表 缩写符号 英文名称 中文名称 BADH 甜菜碱醛脱氢酶 betainne—aldehydedehydrogenase Kan kanamycin 卡那霉素 AS acetosyringone 已酰丁香酮 Cef cefotaxime 头孢霉素 CTAB ammoniumbromide十六烷基三乙基溴化铵 triethyl cety SDS sodium sulfate 十二烷基硫酸钠 dodecyl DMSO sulfoxide 二甲基亚砜 dimethyl X．Gluc 5-溴-4一氯一3-吲哚-p-D— 5-romo．4．chloro．3．indolyl—B-D- glucuronide 葡萄糖氨酸 bromide 溴化乙锭 EB ethidium OD density 光密度 optical PCR chainreaction 聚合酶链式反应 polymerase minute 转每分钟 round rpm per Tris—CI、硼酸、EDTA缓冲液 TBE Iris．CI、H38303、EDTAbuffer buffer Tris．C1、EDTA缓冲液 TE Tris．CI、EDTA Tns 三羟甲基氨基甲烷 Tris(hydroxymethy)aminomethane 摘要 土壤盐渍化是一个世界性问题，是影响农业生产和生态环境的一个非常重要的非生 物胁迫因素。如何利用大面积的盐碱地，提高作物耐盐性是生物科学的一个重要研究课 题。苜蓿是一种被誉为“牧草之王”的多年生优质豆科牧草，它不仅营养价值高，适口性 好，适应性强、抗寒耐旱，是全世界广为种植的优良牧草，而且对生态环境治理、固土 护坡、防止水土流失起到非常重要的作用。如何进一步提高其耐盐抗旱特性，扩大其种 植范围，是当前苜蓿生产面临的重要研究课题，基因工程的发展和应用为苜蓿抗盐育种 开辟了一条新的途径。本实验是苜蓿抗盐碱育种研究课题的一部分，是在已建立的苜蓿 高频组培再生体系的基础上，进行了农杆菌介导的甜菜碱醛脱氢酶基因转化的进一步研 究。主要结果如下： 1．优化了农杆菌介导的苜蓿高效遗传转化体系。本试验在已有工作的基础上，对转 以GUS阳性发生率和抗性愈伤组织率为转化指标探讨了不同苜蓿基因型、不同外植体 类型和外植体的不同生理状态对转化效率的影响，并选取转化效率高的基因型作为主要 受体，侵染15天左右的叶片；在其它因子条件的优化中，适宜的菌液浓度OD600值为 养基中都加入乙酰丁香酮(10mg／L)的处理方式比较好，侵染效率比较高。 2．转化植株的PCR检测。转化研究中获得了大量Kan抗性愈