凉山半细毛羊亲鉴定及系谱构建.pdfVIP

四川农业大学硕士学位论立 摘 要 目前，亲子鉴定中普遍采用微卫星标记，由于其多态信息含量高，均匀分布于整个 基因组中，检测容易、重复性较好、省时，适于进行自动化分析，因而在动物的个体识 别(包括亲子鉴定)、基因连锁分析、群体遗传研究等方面发挥着巨大的作用。本研究 以凉山半细毛羊为研究对象，根据已发表的绵羊第三代基因连锁图谱，选择了绵羊第l、 荧光标记物标记引物、经多重PCR扩增和ABl310毛细管电泳对凉山半细毛羊进行亲权 鉴定，以期揭示出被测个体的真正血缘关系，建立精确的地方绵羊品种系谱图。 亲子关系排除概率由353个个体等位基因频率计算得出，双亲都未知时，累积排除 最终从8个后选父亲中找出215个后裔的父亲，又从147个后选母亲中找出这群后裔的 母亲，为保证鉴定结果准确，所有位点全匹配的才确认亲子关系，最终确认了166个后 裔的父母亲。构建了8个父系半同胞家系图，并合为一个混合家系系谱。这将为以后绵 羊遗传连锁分析、经济性状QTL定位奠定了基础，并对研究绵羊群体结构、历史及多样 性有重要意义。 关键词：凉山半细毛羊 多重PCR 亲子鉴定 累积排除概率 系谱图 堕坐兰型墨兰鲞坚鉴塞垦墨堕塑丝．——．—— 1．前言 Testing)，指应用医学、遗传学和生物学等 亲权鉴定又称作亲子鉴定(Parentage 理论、技术来检测分析父母与子女之间的遗传关联，判断他们是否存在亲生关系。不仅 在法医学上有特殊的用途，而且在动物遗传育种繁殖领域也同样重要。在现代动物育种 中，由于要利用各种亲属的表型资料，准确的系谱十分重要，但有些情况下我们不能准 确地确认某些个体的父母：如放牧方式饲养所产的羊羔，采用混合精液授精得到的后代， 复配的母畜所产的仔，胚胎移植的后代，耳号丢失等。利用微卫星位点的多态性，计算 排除概率来进行血缘鉴定和血缘控制，是明确个体间亲缘关系、建立正确系谱的重要手 段。 Crawford等1995，Ⅵ．3-．de Referencing Walling等2001)。经过亲权鉴定可获得凉山半细毛羊准确的系谱图，建立资源参考家系， 构建半细毛羊遗传连锁图，并可对各种经济性状进行QTL定位。因此用微卫星DNA进行亲予 鉴定在目前动物遗传育种研究中具有十分重要的理论和实践价值。 1．1亲权鉴定的原理 根据遗传规律，子代的遗传基因是由父母双方遗传而来，父亲提供一半，母亲提供 一半。所以后代必定得到父母每方的一对等位基因中的一个，孩子决不会具有父母都没 有的基因。个体识别与亲权鉴定的基本原理有两点：在肯定子代的某个标记基因是来自 生父(BiologicalFather)，而假设父亲(A1legedFather)并不带有这个基因的情况 下，可以排除它是该子代的父亲。在肯定子代的某些标记基因来自生父，而假定父亲也 带有这些基因的情况下，不能排除它是该子代的生父，他可能是孩子的生父，可能性的 大小可通过计算假设父和孩子之间的亲子关系指数(PI)和亲子关系相对概率(RCP) 做出定量的估计。(亲子关系指数是指假设父具备必需基因成为孩子亲生父亲的机率(x) 与随机男子具备必需基因的机率(Y)的比值，表示假设父成为孩子亲生父亲比随机男 子成为孩子亲生父亲的可能性大多少倍，计算公式为PI=X／Y，RCP表示假设父是孩子亲 2 四川农业大学硕士学位论文 RCP≥95％时，已具有肯定亲子关系的意义；但RCP达到什么值时能肯定亲子关系，目前 国内外均没有一个统一的标准。随着遗传标记的增加，RCP理论上可非常接近100％，但 永远不能达到100％，由此可知，被检查的血型系统或分子标记个数越多，假设父亲被排 除的机率越大；这时可以计算出它是该子代生父的概率，我们在使用多个遗传标记系统 Exclusion 时，通常计算其累积排除概率(Combined 干个相互独立的标记个数或系统排除概率分别为Pl、P2、P3……Pn，则n个相互独立的 标记个数或系统试验的累积排除概率为Pc=l一(I-P1)(I-P2)……(1-Pn)。 1．2亲权鉴定的方法及进