家蚕第14连锁4个标记基因的ssr分子标记定位研究.pdfVIP

摘要 家蚕第14连锁群4个标记基因的SSR分子标 记定位研究 特种经济动物饲养专业硕士研究生胡海 指导教师代方银副教授 鲁成教授 摘要 家蚕作为鳞翅目的代表昆虫，又是遗传学研究的极好材料。在数千年的养蚕历史中，因 自然选择和人工诱发，有着丰富的遗传突变。家蚕连锁遗传图谱研究历经百年，已将300多 个突变基因定位在分布于28个连锁群的220多个基因位点上。随着DNA分子标记技术的发展 和在家蚕研究中的应用，家蚕分子连锁图谱研究取得丰硕成果，先后构建了RFLP、RAPD、AFLP、 SSR、SNP分子标记图谱。但是家蚕经典连锁图与分子标记连锁图之间仍然处于孤立的状态， 使这些成果的应用受到限制。因此，家蚕分子连锁图谱和经典遗传图谱的整合成为目前家蚕 遗传学的重要课题和研究热点。 家蚕SSR分子连锁图的发表以及SSR分子标记技术的诸多优点为家蚕分子连锁图谱和经 典遗传图谱的整合创造了成熟的条件。本研究利用家蚕SSR分子连锁图的分子标记对经典遗 传图谱第14连锁群的4个标记基因玖肫h、历、Da进行了定位研究，研究内容和结果如下： (1)所采用的作图群体是回交群体：以F。雌回交隐形亲本的回交群体(BC，F)和以F。 雄回交隐形亲本的回交群体(BC-M)。BC，F群体用于标记的筛选与连锁关系的确定，BC。M群体 用于对标记进行基冈型分析，以计算标记基因间与sSR标记间的遗传重组率，确定它们之间 的遗传距离。配制作图群体的材料：选用西南大学家蚕基因资源库的基因定位系统17—141 ￡，·舭h和近交系“大造”配制∥和删b基因的连锁分析组合和定位分析组合；选用17一142 Da和09—500历配制历和Da基冈的连锁分析组合和定位分析组合。 两南人学硕十学何论文 和“人造”之间进行多态性筛选，找剑了9对在两个亲本间表现多态性的引物，再用这9对 引物对近锁分析组合BC．F群体的22个个体(11个表现丝胶茧性状的个体和11个正常个体) 计和分析，利用作图软件得到玖舭，-s标记基因和与它们连锁的4个SSR标记的连锁图，该 标记是S1419，距肋～基因0．0cM。 (3)同样用这26对SSR引物在杂交组合的亲本17—142Da和09—500口j间进行多态筛 选，得到8对在两个亲本间表现多态性的标记。通过用这8对SSR标记在BC-F群体中进行连 作图软件得到历和Da标记基因和与它们连锁的4个SSR标记的连锁图，该连锁图总图距为 55．8cM，距离Da最近的标记是S1414，距Da基因13．1cM。 (4)利用作图软件对两次实验得到的两张连锁图进行整合，将4个标记基因和与它们 与经典连锁图谱14连锁群完全一致，遗传距离也基本一致。我们的研究结果表明，完全可以 通过多次实验，全面整合家蚕经典连锁图和分子连锁图的各连锁群。 关键词：家蚕染色体标记基因 分子标记基因定位 Ⅱ ABSTRACT onSSRMolecularMarker Study of Markeron Four 14th Mapping gene in LinkageGroup Masterofthe of EconomicAnimals BreedingSpecial HUHai ProfDai SupeⅣisor：AssociateFangyin ProfLU Cheng