屠宰山羊卵巢有卵母细胞体外培养成熟的研究.pdfVIP

摘 要 近年来，胚胎移植的商业应用和各种胚胎工程等方面的研究和开发都需要大量 的优质早期胚胎。胚胎的来源和成本已成为制约胚胎工程实用化的重要因素。把卵 泡卵母细胞进行体外成熟培养和体外受精后，便可获得大量廉价的优质早期胚胎， 既克服了超数排卵技术的局限性，又可满足科研和生产对胚胎的需求。 本研究以屠宰奶山羊的新鲜卵巢为材料，利用抽吸法和切割法，回收可培养有 腔卵母细胞。对120个卵巢的卵母细胞回收率及其回收可培卵数进行统计，平均每个 卵巢可获得卵母细胞4．72个，但是可以用于培养的只有1．43个。从每个卵巢获得可 用卵数量看，切割法优于抽吸法。结果表明卵母细胞采集方法对卵母细胞数量和质 量有显著影响，而切割法是采集山羊卵巢卵母细胞的一种简单而有效的方法。 实验所得的山羊卵巢卵母细胞体外培养成熟的总成熟率为82．5％(301，365)，说 明本研究所采用培养方案是适合于山羊卵巢卵母细胞体外培养成熟的。 血清添加量的不同，对卵母细胞体外成熟率有很大的影响。本实验比较了基础 培养液中添加FBS体积分数为O％、10％和15％时的成熟率。结果证明：不添加FBS 著(P0．05)。体外成熟时间的长短对卵母细胞成熟有很大的影响，本研究结果表明 不同血清成分对山羊卵巢卵母细胞体外培养成熟有一定的影响。本研究在基础 生产中可考虑用NCS代替FBS用于大批量体外培养山羊卵巢卵母细胞。 成熟，成熟率分别为82．1％、81．7％、83．3％。结果表明：培养温度只要在山羊正常 体温及其变动范围内，则成熟率无显著差异(PO．05)，最佳温度以39．0℃为宜。 培养液内一般情况下添加青霉素、链霉素用于防止细菌污染，，本研究表明未添 说明实际生产中，在条件相对比较简陋的情况下进行卵母细胞的体外培养是可行的。 关键词： 屠宰山羊有腔卵母细胞分离采集法体外培养成熟第一极体 1前言 1．1卵母细胞体外培养成熟研究概况及前景展望 哺乳动物卵母细胞的体外成熟培养技术是现代哺乳动物体外受精技术和胚胎工 程的基础环节。最早对哺乳动物卵母细胞进行体外培养的是德国科学家Schenk．S．L。 他于1878年将兔和豚鼠排卵前的卵母细胞和附睾精子放入相应的子宫液中培养，发 现卵丘细胞分散，第二极体排出，进一步培养时有卵裂发生。此后，人们对卵母细 胞体外培养进行了深入研究。1959年，Chang把体外受精的兔卵裂卵移植给受体母 20世纪60年代以后，卵母细胞体外 兔，获得了世界上第一胎哺乳类试管动物‘25)o 培养的研究得到迅速发展，众多科技工作者对哺乳动物卵母细胞的成熟培养进行了 探索，并取得了很好的研究结果“8‘72、7。他们不仅仅对培养方法进行了许多重要改 进，而且使卵母细胞的体外培养研究的对象由实验动物拓展到家畜领域。 4～8细胞期胚胎，手术移植后获得世界上第一例“试管牛犊“4”。Hanada等也把牛 卵巢卵母细胞经体外培养、体外受精处理后进行了移植，获得了产犊的结果¨钔。国 内外对哺乳动物卵母细胞体外培养技术的研究进展很快，我国学者从80年代末，开 始家畜卵母细胞体外成熟培养的研究工作并取得较大进展“’12’16‘3。1996年，徐照 学等利用屠宰后的黄牛卵巢，建立了一套有效的卵泡卵母细胞体外培养成熟．体外受 精．受精卵体外发育程序，使受精卵的卵裂率以及桑椹胚和囊胚的发育率分别提高到 78．3％、59．3％和50．8％q”。旭日干等将绵羊卵泡卵母细胞体外受精移植获得羔羊“∞。 但是，关于山羊卵母细胞的体外培养研究进展还不是很大。羊卵巢卵母细胞的 体外培养研究最早见于Edwards，他曾探索了卵母细胞的成熟条件及影响卵母细胞成 精子受精的试管后代。’。1990年。钱菊汾等用利用山羊输卵管成熟卵母细胞进行体 外受精，获得我国首例试管山羊幢1’冲。 培养山羊卵泡卵母细胞获得55．5％的成熟率；滨野光市(1985)用含有雌激素的Ham’ SF12作为成熟培养液，获得68．6％的成熟率，体外受精后得到3～5细胞胚，但未能 2 卵泡卵母细胞，成熟率为68．4％(21)o但是，上述实验所用的卵巢均取自经超排处理 的供体山羊，这样回收利用的卵母细胞大大受到数量的限制。 自从发现牛卵泡中的卵母细胞可在体外培养介质中恢复减数分裂现象之后，从 屠宰场废弃的卵巢中采集卵母细胞，在体外培养成熟，成为研究牛胚胎生