应用基因芯片筛莫尼茨绦虫种间差异表达基因.pdfVIP

摘要 目的为加深对莫尼茨绦虫表达基冈信息的了解，建立了扩展莫尼茨绦虫基因表达谱芯片，达 到研究莫尼茨绦虫成虫不同发育阶段基因表达改变的目的，从分子水平上探索与生长发育有关的基 因。 mechanismat5‘endof 方法利用SMART(Switching 司的SMARf蹦cDNA Library mRNA Reagent提取总RNA和Oligotex cDNA，通过LD—PCR合成并扩增ds IISK+质粒载体中，最后将重组质粒转化到E．coli 柱去除小片段，连接到靳I消化过的pBluescript DH-5 a内得到原始文库，扩增后将文库保存于96孔细胞培养板中。 用文库得到的1 080个靶基因，9个阳性对照，16个阴性对照，8个空白对照，每 密度为863点／cm2，其中包含1 个基因做3个重复。用扩展莫尼茨绦虫的幼节、成节、孕节以及贝氏莫尼茨绦虫的幼：符、成节、孕 节与扩展莫尼茨绦虫头颈节总RNA与芯片进行杂交，获得不同发育阶段的差异表达基因，并选择其 中有差异表达的部分基因进行实时荧光定量RT-PCR验证。 3 080 kb之间，测序结果显示EST平均长度586bp。经5I端测序获得2642条有效序列，归并为1 最多的是两类编码结构蛋白和酶的基因。 茨绦虫基因表达谱和6张扩展莫尼茨绦虫基因表达谱。通过差异基因筛选，共找到扩展莫尼茨绦虫 幼节特异表达基因1条，成节特异表达基因50条，孕节特异表达基因42条：贝氏莫尼茨绦虫幼 节特异表达基因8条，成节特异表达基因54条，孕节特异表达基因31条；两个虫种共有的成节 特异表达基因23条，孕节特异表达基因5条，未找到幼节共有的特异表达基因；筛选出扩展莫尼 茨绦虫表达但贝氏莫尼茨绦虫未表达或该基因在两虫种间同源性低的基因16条。 结论成功构建了扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库，获得了较丰富的扩展莫尼茨绦虫成虫 表达基因，为筛选扩展莫尼茨绦虫的功能基因全长序列奠定了基础。后续的芯片杂交筛选出特异表 达基因，这些基因经GO功能分类主要有：胞苷酸激酶、cAMP依赖的蛋白激酶、磷酸丙酮酸水合酶、 金属离子结合、ATP结合等，大部分基因功能未知。成节特异高表达基因主要有钙调素、烯醇酶、B一 微管蛋白、胞苷酸激酶和腺苷酸激酶、富含半胱氨酸蛋白前体等；孕节特异高表达基因主要有A95 前体等；对这些基因的生物学功能结合当前数据库和文献报道，成节钙调素高表达而孕节则下调， 可能说明钙调素在成节生殖功能最旺盛时有利于肌肉收缩，排出配子以便精卵结合以及其它相应功 能所需；核苷酸激酶和DNA和RNA等核酸链的合成有关，成节在生殖最旺盛时其DNA复制必然速度 很快，也是最需要的；可以通过寻找抑制烯醇酶表达的靶位点或者药物，来抑制绦虫的生长，进而 控制其传播。 timeRT-PCR 关键词：扩展莫尼茨绦虫；贝氏莫尼茨绦虫；cDNA文库；cDNA芯片；real Abstract To the the researchinto of Moniezia the objective knowledge expressedgenes，establishexpressed on inMoniezia atdifferent geneprofile．Studygene changes tapewormsegments expression developmental and the