牛卵母细胞及胚体外培养体系的建立.pdfVIP

摘要 摘要 本实验重点是在新建胚胎实验室建立与优化牛卵母细胞及胚胎体外操作技术体系，进一 步推动生物胚胎工程的发展，并为牛的体细胞克隆和转基因牛的研究打下基础。为此，从屠 基础液，对其进行成熟培养，研究FSH／LH／13r争E2／EGF浓度、卵巢的运输时间和保存温度、 卵母细胞采集方法、卵巢所处生理状态等对牛卵母细胞体外成熟的影响；研究了孤雌激活体 系与牛卵母细胞在药物中作用时间对牛卵母细胞孤雌激活的影响；研究了受精体系与成熟卵 母细胞受精前的处理方法对牛卵母细胞体外受精的影响；还研究了胚胎体外培养体系对牛胚 胎体外发育的影响。结果表明： ’ 1．在新建胚胎实验室建立了牛卵母细胞的体外成熟体系。在屠宰场选择处于卵泡期的奶 牛和黄牛卵巢，保存在30C生理盐水中4h内运送回实验室，采用抽吸法采卵，采用成熟液 TissueCulture LH+50 Medium一199(Earle’s)液+20％FBS+50p．g／ml gg／mlFSH+20#g／ml17}E2 对A、B级卵母细胞进行体外成熟，24小时成熟率可达80％。 2．EGF能显著提高牛卵母细胞的成熟率，且随着EGF添加量的不断增加牛卵母细胞的成 熟率也呈上升趋势，添加50p,g／ml时，成熟率可达到82．2％。但由于药品昂贵，未继续做大 剂量添加的比较。 6-DAMP作用4h， 3．牛卵母细胞的孤雌激活条件为5mmol／L离子霉素作用5min，2mmol／L 36h卵裂率和囊胚率分别可以达到85．1％和26．8％。 4．由于IVF．100无需经常配制、保存方便且可以获得较高的卵裂率，所以本实验采用 IVF．100为受精液，卵母细胞成熟20小时后采用透酶+口吸管消化的方法处理，获得了较好 的受精效果，卵裂率可达(76．8％)。 5．采用B2+vero细胞的胚胎共培养体系，可获得较高的卵裂率(80．6％)和囊胚率 (32．1％)． 关键词：牛；卵母细胞；体外成熟；孤雌激活；体外受精；胚胎培养 m ESTABLISHAⅡ!NTOFINVITROCULrURESYSTEM INBOVINEOOCYTEANDEMBRYO Abstract Inthis isto aim establishand the ofinvitro study,the technology optimizesystems operation ofbovine and innew oocyteembryo laboratory，furthermoreembryobiology promote engineer alsofoundthebasisfor ofcellcloneand inbovine．Forthis development,and study transgenie collectedthebovine ofovarieswhosesurfacefolliclesdiameterswere2-6 objective，we oocytes mmfromthe werematuredinthebase mediumTCMl99 slaughterhouse，andthey maturing with sudiedtheeffectsonIVMofbovine o