牛有腔卵泡卵母胞体外成熟和体外受精的研究.pdfVIP

摘要 本试验从屠宰场收集了48头黄牛、34头水牛和8头黑白花奶牛的卵巢共180 个。共回收卵母细胞1050枚。其中获得可用卵母细胞973枚。水牛平均每个卵巢可 收集3．22枚可用卵母细胞，只相当于黄牛和黑白花牛(分别为6．72和6。81)的一半； 于黄牛或黑白花牛(分别为94．59％和96．69％)。结果表明，水牛卵巢有腔卵泡少， 卵母细胞产量少、质量差。 本研究比较了三神采集黄牛卵泡卵母细胞的方法。用抽吸加切割法平均从每个卵 巢回收的卵母细胞显著(Po．05)高于抽吸法。而回收的可用卵数与抽吸法之间差异 不显著(PO．05)。结果显示，用切割法采集的裸卵比抽吸法多，抽吸加切割法是一 种能够采集较多可用卵母细胞的好方法．但是该法手续繁杂，适于一次只能收集少量 卵巢时使用。 在牛卵母细胞成熟培养液中不添加17B-E2的情况下。分别添加O．3％PVP和 13-EL的情况下，分 和53．95％，二者无显著差异(P0．05)；在成熟培养液中添加17 养液中用0．3％PVP代替10％FBS是可行的。在对水牛的试验结果也得出同样结论。 8-E2时，卵母细胞的体外成 另外，在黄牛(或水牛)卵母细胞成熟培养液中添加17 B．E2组，试验 熟率和受精率都显著(P．∞．05)或极显著(PO．01)的高于不添加17 结果表明，178．E2对牛卵母细胞的成熟和受精是必要的。同时，本试验对现行的黄 牛体外受精程序应用于水牛体外受精的可行性进行了探讨，结果显示，虽然水牛卵母 细胞在体外培养可成熟和受精，但是在同一处理下，水牛卵母细胞的成熟率和受精率 程序进行水牛的体外受精是有效、可行的，但可能所用的受精液或受精过程的某些步 骤不太适合水牛卵母细胞，还需进一步改进，今后水牛卵母细胞体外受精研究的重点 应放在提高体外成熟的培养效果上，以提高水牛体外受精的整体效率。 本试验通过用两种不同的方法处理受精前的牛冷冻精液来研究其对卵母细胞体 外受精率的影响。本试验用上游法和Percoll法处理牛冷冻精液后，黑白花牛卵母细 的研究结果中也得出同样结论。结果表明，上游法和Percoll法是两种常用的精子处 理技术，但Percoll法更简便、快速，如果方法应用得当，Percoll法是首选方法。 关键词：牛、有腔卵泡、卵母细胞、体外成熟、体外受精 2 1．前言 vitro 上第一例体外受精动物(兔)以来，哺乳动物体外成熟(in vitro vitro 体外受耩(in fertilization，IVF)和受精卵的体外培养(in 术研究进展很快。目前．体外受精过程的各个步骤都可在体外成功进行。例如，卵母 细胞的体外成熟、精子的体外获能、卵母细胞的体外受精、受精卵的体外发育以及配 予和胚胎的冷冻保存等。体外受精研究的深入开展，一方面加深了人们对受精机制的 认识，另一方面为动物育种、治疗人类不孕症提供了有力的手段。 随着体外受精技术的发展，牛卵母细胞的体外成熟和体外受精技术显得愈来愈重 孪生试管牛犊降生(Lu，1988)。目前，试管牛生产技术已逐步由研究向生产应用阶 段发展，但是，受精卵囊胚发育率还比较低，一般为20％-40％。许多证据表明，体 外受精囊胚期前的胚胎代谢活动主要由母源性基因及其产物，如mRNA、rRNA、蛋 白质等所调控的，因此卵母细胞体外成熟和体外受精情况是决定其囊胚发育率高低的 关键。 提高卵母细胞成熟率对其后受精率和囊胚发育率的提高有很大促进作用，影响卵 泡卵母细胞体外成熟的因素很多，激素和血清是影响牛卵泡卵母细胞ⅣM的两个重 要因素。在对成熟培养液中添加雌二醇激素是否能促进卵母细胞培养效果还有争议， 但现在许多学者认为雌二醇的存在对于卵母细胞的完全成熟是有益的。同时，大多数 学者认为在培养液中添加适量血清可促进卵母细胞