犬高危穿透性角移植术后排斥反应与tnf-α变化的相关性研究.pdfVIP

犬高危穿透性角膜移植术后排斥反应 与TNF．Q变化的相关性研究 临床兽医学专业硕士研究生徐茂森 指导教师 郑小波副教授 摘要 目的：本试验以重庆本地小型杂交犬为试验动物，先构建高危(化学伤)角膜病理模型，而 后进行穿透性角膜移植手术，术后观察持斥反应与外周血和角膜组织中n虾．a变化情况。方 法l(1)选择健康(无眼疾)本地犬34只作为试验犬，使用lmol，L的N圃lH溶液对所有试验 犬左跟角膜正巾进行碱烧伤。术后每天使用裂隙灯显微镜对术眼观察各层情况并测量新生血 管长度。(2)选择17只健康本地犬作为供体犬，对34只碱烧伤模型犬行穿透性角膜移植手术， 并严格监控术中、术后的并发症，术后分生理盐水组和(1％】R肌八)治疗组分别处置。每天裂 隙灯显微镜观察术眼情况并记录。(3分别取生理盐水组和(1％RApA．)治疗组S只于建立烧 伤模型前，手术当日，术后第7、14、21、28、35、42、49、56d采前肢头静脉血，用酶联免 疫吸附(ELISA)双抗体夹心法检测1NF．o浓度；其余18只犬随机分成两组(处置方法同上)， 分别在术后第7、28、S6d各组随机抽取3只取暇，另外选取3只健康犬作为空自对照组，对 所取角膜均分三份，一份用于测定犬角膜组织n●F．o含量，一份用于HE染色观察角膜组织 病理学变化；最后一份进行荧光定量PCR检测，最后使用△△ct法分析角膜组织n邗·o基 因的相对表达量。试验结果s(1)烧伤当日角膜全层即刻呈现出银白色云雾状．3d后出现不同 程度的水肿，混浊度明显加剧，5d后角膜缘开始浸润新生血管并向角膜中心方向生长，”后 炎症句n剧，血管向角膜中心弥散，9d左右某些角膜基质层溶解现象加剧。新生血管变得粗大． 模型建立成功。(2)所有PKP术犬均无缝线崩裂现象，但有两例在术后3天即发生急性捧斥反 应需重新补充：生理盐水组术后术犬术眼周围均有大量分泌物分泌，3d时植片均出现轻微水 肿，6d时角膜植片植床交界处开始出现明显炎症反应，7d时有部分血管开始长入角膜植片内， 15d时所有术犬均出现捧斥反应，2阳时植片开始出现质感变硬的现象，56d时角膜组织开始 肉质化：(1％RAPA)治疗组眼分泌物较之生理盐水组少，3d时植片透明无明显水肿现象，6d 时术犬出现新生血管向植片生长的现象。部分犬只角膜出现轻度水肿。7d时新生血管有所增 多但仍来到达搀斥反应标准。15d时植片的水肿和混浊程度有明显的改善，新生血管出现消退， 2蹦时植片转归透明，56d时除3例捧斥外其余角膜植片仍保持透明，未出现捧斥反应。(3) 碱烧伤后及碱烧伤角膜移植术后早期各组实验犬外周血中11盯-a含量均升高，生理盐水组含 量于镐d后达最高水平(94．10±1．66髂·mrl)并在以后的监测期内维持较高含量．治疗组 西南大学硕士论文 在临床诊断捧斥反应发生前术后第14d达最高水平(68．22士0．90陌·IlIrl)．而后开始下降， 到术后5酣几乎接近术前正常水平(37．76±1．07’陷·mld)，生理盐水组和治疗组与空白对照 组相比差异有统计学意义(P叼．01)：碱烧伤角膜移植术后各组(空白对照组除外)实验犬角膜 组织中n羽卜a含量均升高，在术后2黝时治疗组出现峰值(31．99±o．84路·ml’1)而后下降， 生理盐水组含量在术后2醐后仍在增长，并在术后5酣时达到37．53±O．94鸭·Ⅱll_且仍有继 续增长的趋势；病理组织学结果显示，术后7d：生理盐水组角膜组织各层细胞出现严重水肿， 上皮细胞层有溶解、丢失现象，基质层增厚，内有一定量新生血管生长及红细胞侵润。内皮 细胞部分断裂、丢失．治疗组角膜各细胞层有轻微水肿现象，上皮层有所增厚，有少量红细 胞侵润．后弹力层和内皮层结构完整。术后2跗：生理盐水组角膜组织各层细胞水肿加剧，上 皮细胞层开始出现断裂脱离现象，基质层内有大量新生血管生长及红细胞侵润，胶原纤维原 有捧列被完全打乱，后弹力层与内皮细胞层开始大量脱离和丢失．治疗组术犬角膜各细胞层 规则捧列，水肿现象明显消退，上皮层完整无丢失，基质层纤维捧列较为紧凑均匀，新生血 管生长和红细胞侵润现象有所改善，后弹力层和内皮层结构仍保持完整。术后56d：生理盐水 组上皮细胞层几乎完全溶解，仅存的细胞也已坏死，红细胞以完全侵润整个基质层，几乎没 有内皮细胞存留．治疗组各细胞层组织学结构完全一致，无明显水肿增厚现象。基质层纤维 均匀排列，内皮层细胞仅少量缺