牛il-2和in-γ对asia1型口蹄疫病毒g-h环多肽免疫效果的影响.pdfVIP

摘 要 摘 要 口蹄疫(Foot and mouth disease, FMD ）是由口蹄疫病毒(FMD virus, FMDV)所致的一种偶 蹄动物共患的急性、热性、高度接触性传染病，该病的暴发会给国家带来巨大的经济和政治 影响。传统疫苗在该病的防治过程中虽然起着举足轻重的作用，但其本身产生的副作用使得 安全高效新型FMD 疫苗的研制成为了必要。目前，最常见的新型FMD 疫苗是生物合成多肽 疫苗。多肽疫苗具有安全稳定、易于生产、针对性强的优点，但免疫原性一般较差。因此， 使用多肽疫苗进行免疫时加入合适的佐剂是必不可少的。本研究从细胞因子佐剂的研究出发， 将牛IL-2 、IFN-γ真核表达质粒和牛IFN-γ成熟蛋白（pr-mBoIFN-γ）分别同Asia1 型FMDV G-H 环多肽（FMDV VP1 蛋白137-158aa）融合蛋白联合免疫小鼠，观察重组牛IL-2 和IFN-γ 对FMDV G-H 环多肽免疫效果的影响。 本研究对G-H 环多肽融合蛋白（G-H ）及pr-mBoIFN-γ进行了原核表达并纯化，构建了 含有信号肽序列的牛 IL-2 和牛 IFN-γ 真核表达质粒 pcDNA3.1-pBoIL-2 和 pcDNA3.1-pBoIFN-γ。为了检测构建的真核表达质粒是否能在哺乳动物细胞内正常表达，将 两种质粒和空载体pcDNA3.1 分别转染BHK21 细胞并利用间接免疫荧光试验体外鉴定其表 达。结果显示，pcDNA3.1-pBoIL-2 和pcDNA3.1-pBoIFN-γ 转染后的细胞出现了明亮的绿色 荧光，而空载体转染后的细胞则没有荧光出现，这说明真核表达质粒 pcDNA3.1-pBoIL-2 和 pcDNA3.1-pBoIFN-γ 在 BHK21 细胞中进行了成功表达。将两种细胞因子的真核表达质粒和 pr-mBoIFN-γ分别与G-H 组合免疫昆明鼠，并设立阴阳性对照。用间接ELISA 试验和病毒中 和试验 (Virus Neutralization Test, VNT) 检测免疫鼠的体液免疫状况。结果显示，首次免疫后 各组小鼠血清抗体增长不明显；第2 次、第3 次免疫后阴性对照PBS 免疫组和G-H+pcDNA3.1 免疫组的抗体水平没有明显变化，而 G-H+pcDNA3.1-pBoIFN-γ 免疫组、G-H+pr-mBoIFN-γ 免疫组和G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2 免疫组的抗体水平显著高于阴性对照组却又显著低于灭活 疫苗免疫组(P0.05) 。此外，G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2 、G-H+pcDNA3.1-pBoIFN-γ 免疫组中 和抗体滴度 (neutralizing antibody titer, NAT)显著高于G-H ＋FA 免疫组，表明与弗氏佐剂比 较，细胞因子分子佐剂在免疫中会起到更为显著的效果。淋巴细胞增殖试验结果表明，首次 免疫后35 天，G-H+pcDNA3.1-pBoIFN-γ 免疫组小鼠淋巴细胞显示出了最高的增殖水平，其 次是G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2 免疫组和G-H+Pr-mBoIFN-γ免疫组，三者的淋巴细胞增殖水平 均显著高于G-H+pcDNA3.1 免疫组和PBS 免疫组。细胞因子检测试验结果显示，所有免疫组 中，灭活疫苗免疫组诱导了最高水平的 IL-4 ，G-H+Pr-mBoIFN-γ 免疫组诱导了最高水平的 IFN-γ，这与抗体检测试验和淋巴细胞增殖试验检测结果是一致的。而与 G-H+pcDNA3.1 免 疫组比较，G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2、pcDNA3.1-pBoIFN-γ 和G-H+pr-mBoIFN-γ 免疫组无论 是IL-4 的相对表达水平还是IFN-γ 的相对表达水平均有显著的提高，进一步说明rBoIL-2 和 rBoIFN-γ对G-H 免疫小鼠产生的体液免疫和细胞免疫均具有增强作用。 总之，本研究为Asia1 型FMDV G-H 环多肽在FMD 免疫方面的研究和应用提供了理论 依据和材料支持，也为细胞因子佐剂的进一步发展奠定了理论基础。 关键词：IL-2 ；IFN-γ；口蹄疫病毒；G-H 环；免疫效果 I Abstract The Effect of