猪a组轮状病毒p7基因工程乳酸菌的制备及其免疫效果的检测.pdfVIP

猪A组轮状病毒Vp7基因工程乳酸菌的制备及其免疫效果的检测 摘要 一。由于目前尚无治疗轮状病毒的特效药物，因此预防显得尤为重要。为此，世界卫生 组织多次呼吁各国科学家研制开发有效的轮状病毒疫苗，并将其列为最优先发展的疫苗 项目之一。随着分子生物学研究的不断深入，现己明确VP7是RV的主要外壳蛋白和保 护性抗原之一，在疫苗的研制中具有重要的意义。 本实验选择乳酸菌作为受体菌株表达外源基因Vp7，即可将乳酸菌的益生功能和外 源基因的特异性免疫相结合，从而研制猪轮状病毒Vp7基因工程乳酸菌。目的在于为开 发研制预防猪轮状病毒病的基因工程乳酸菌口服疫苗奠定实践基础。 在本研究中，将猪A组轮状病毒主要保护性抗原Vp7克隆至可在大肠杆菌和乳酸 菌中穿梭表达的具有红霉素和胸苷酸基因的双标记表达载体。经过优化电转化条件，将 重组质粒pW425et-Vp7转化到乳酸菌受体菌中，通过乳酸菌质粒的提取，酶切分析和 PCR方法鉴定阳性克隆质粒。将筛选好的阳性克隆进行SDS—PAGE及Western bloting检 检测血清抗体和SIgA的水平。另外，免疫后每隔10天，采用流式细胞仪检测CD3+、 上所得数据进行分析比较。 结果表明，猪A组轮状病毒Vp7基因在乳酸菌中获得了表达，并制备了猪轮状病 毒基因工程乳酸菌。将猪轮状病毒Vp7基因工程乳酸菌给小鼠免疫后，具有较好的免疫 效果。从而为进一步研究轮状病毒基因工程乳酸菌口服疫苗奠定基础。 关键词：轮状病毒，Vp7基因，乳酸菌，免疫检测 A ofPorcineRotavirus Gene Preparation GroupVp7 LactobacillusandDetectionofProtective Immunity Abstract Rotavirusis oneofthemain of infantandvirouskinds animals pathogenycausing ped-age the medicineisnot the is nonbacterialdiarrhea．At to manufactured，SO patent prevention present,dueing more scientistsincountriesto effectiveRotavirusvaccine important．WHOappealed develop manytimes， as withlucubrationofmolacular andtookit oneofthemost developed biology, priority proceedings．Along maincoat VF7isnot thebaseofRV alsothemain protein only serotypetyping，but protectiveantigen． Inthis Wasselectedas strainto combined