猪hsp70的核表达、多克隆抗体制备及猪温病毒感染对hsp70蛋白的影响.pdfVIP

·． 蛋白的影响 摘要 HeatShockProtein 猪热休克蛋白70(Procine 70，P．Hsp70)是热休克 蛋白70家族成员之一，为一种分子伴侣蛋白。Hsp70可以结合多肽暴露的 疏水区域，促进多肽折叠和抑制蛋白聚集的发生。Hsp70在耐热反应、跨膜 蛋白和核内蛋白的转运、细胞发育等生物进程中发挥着重要的作用。猪 表明，猪感染猪瘟病毒后，外周血单核细胞中Hsp70mRNA和蛋白表达均 出现明显的变化。这一发现提示Hsp70在病毒感染过程中可能起着非常重 要的作用。目前还没有猪瘟病毒在体外感染宿主细胞过程中Hsp70蛋白水 平变化的相关报道，尚不清楚Hsp70与猪瘟病毒相互作用的机制。本研究 · 的表达变化，以进一步探索HSp70在猪瘟病毒感染过程中的作用机制。 本研究通过分离巴马小型猪淋巴细胞并抽提总I喇A，运用RT．PCR技 纯化重组菌的上清和沉淀中的重组蛋白。用纯化的蛋白免疫小鼠，采集小 鼠血清进行抗体特异性和敏感性鉴定。实验结果表明，Hsp70基因3’端的 反应，血清抗体效价达到1：8000。 使用制备的抗Hsp70多克隆抗体检测感染猪瘟病毒的PK．15细胞中 达并没有出现明显的变化。当42℃热休克处理感染猪瘟病毒细胞和未感染 病毒细胞时，Hsp70蛋白在感染病毒的细胞中的表达量要高于未感染病毒细 胞的表达量。 ．．一 ．． 本研究对猪Hsp70进行部分基因克隆和原核表达，制备了抗猪 重要的作用。本研究为深入探讨猪瘟病毒感染宿主机制提供了良好的研究 基础和很好的参考数据。 关键词：猪， 热休克蛋白70， 基因克隆与表达， 多克隆抗体制备，． 猪瘟病毒 of and ProkaryoticExpression of Hsp70Preparation Polyclonal Innuenceof inPK—l5 Antibody，and Hsp70 CellsClassical by SwineFever Virus ABSTRACT Porcine isamemberoft11e Hsp70 which mnctions Hsp70faInily as call ch印eron bindto proteins．TheHsp70 domainof hydrophobicexposure pan of of polypeptides，facilitatenascent