石家庄地区猪链菌的分离鉴定及其快速检测方法的建立和应用.pdfVIP

摘要 猪链球菌(Streptococcussuis，ss)是一种重要的人兽共患病原菌，急性病例常表现 为出血性败血症、脑膜炎、突然死亡，慢性病例以关节炎、心内膜炎为特点，主要引 起人急性脑膜炎、感染性休克综合征甚至死亡。本文从病原、流行病学、临床症状及 病理变化、毒性因子、检测方法、药敏试验以及防治等方面分别做了详细的综述，并 通过病原分离鉴定、猪链球菌2型毒力因子的PCR检测、猪链球菌1、2、7和9型 的双重PCR检测方法的建立及应用等三个试验对石家庄地区猪链球菌病的发病、快 速检测方法的建立和应用及其防治情况进行了针对性地阐述。 本试验分别从石家庄市地区各县市猪场送检的疑似病例中分离得到72株猪源链 球菌，选择其中具有一定区域、特定致病类型的代表性菌株18株，进行了病原分离 和分群鉴定，并与标准株进行了对比试验。初步证实本地区流行菌株仍以兰氏分群C 此外还出现1株G群占5．6％(1／18)，还存在两株未定群的猪链球菌。其分布无明显 的地域性。 · 石家庄地区SS的毒力因子分布情况不很清楚，本实验对石家庄地区SS分离株 的毒力因子进行检测。选取猪链球菌8种主要毒力因子，设计与合成8对引物，用 家庄地区的猪链球菌与国内其他地区SS分离株的基因型不同，提示石家庄目前SS 的主要流行菌株是具有部分毒力因子的弱毒菌株。 以猪链球菌特异性的谷氨酸脱氢酶基因(gdh)及猪链球菌型特异性的荚膜多糖合 行PCR扩增，建立了猪链球菌l、2、7和9型的双重PCR方法，并用猪链球菌所有 35个血清型的参考菌株，B群、C群、D群各1株链球菌及4株非链球菌菌株验证了 l、2、7和9型双重PCR方法的特异性；对双重PCR进行了敏感性试验，结果l、2、 7和9型的双重PCR都在100cfu时仍能扩增出目的基因片段，；试验结果显示所建立 的检测方法具有良好的特异性和敏感性。选取21株已知的2型菌株用2型的双重PCR 方法进行了检测，其检测符合率为100％。在石家庄市周边区县随机采取了360份健 康猪的扁桃体和136份病猪组织，用所建立的猪链球菌l、2、7和9型的双重PCR 方法对其进行了猪链球菌的检测。从360份健康猪扁桃体中检测鉴定出猪链球菌54 株，其检出率达到15．0％。54株猪链球菌中，2型菌有8株，7型菌有3株，9型菌 有3株，未能检测到l型猪链球菌，40株菌未能进行定型。而从136份病猪组织中 检测鉴定出了24株猪链球菌，分别来自6个区县，结果发现其中的2型猪链球菌2 株，而7，9型猪链球菌各l株，其余均不是l、2、7和9型猪链球菌。 关键词：猪链球菌；分离鉴定；双重PCR；检测 onIsolationandIdentificationandthe Detectionfor Suis Study Rapid Streptococcosis indifferentdistrictof Shijiazhuang Candidate：Zhu zijie Medicine Veterinary Specialty：．Preventive Advisor：Sun Baohua Jiguo；Zhao Abstract all ofhumanand isan Suis(ss)isimportantpathogen beinganimal．Streptococcus that zoonosisbacteria