稳定表达乙型脑病毒ns1蛋白细胞系的建立.pdfVIP

摘要 流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis Nile virus，WNV)、圣路易脑炎病毒(Saint-Louisvirus，SLEV)和墨累滗谷脑炎 encephalitis 病毒(／durrayValleyencephalitis 和南噩。NSl蛋自俸为一种膜功能相关耱蛋愈，可能参与病毒的晕期复制、RNA复 制或病毒组装和释放，是主要的抗原成分之～。NSl蛋囱不参与组成毒粒，因而没有 中和活性和血凝抑制活性，但它共有可溶性补体结合活性，可在不出现中和抗体的情 嚣下诱生保护力，这种保护作用依赖于抗体的片段。到麓翁势止，研究人爱对NSl 蛋鑫的俸用撬制尚不十分清楚，这就要求对其结构、功麓及特性进行深入的研究。然 丽，原核细胞表达的NSi蛋白不能彤成原有的分子构象，给研究带来局限性，因此 需要建立麓稳定表达J嚣VNSl蛋囊的真核细胞系。 本研究将乙型脑炎病毒SAl4，董4屹株鲶NSl基因密码予优化舞，进行人王合成。 将NSl基因亚炎隆至真核表达载体pCAGneo审并构建重组震粒，对其进行酶切鉴定 纯DH5ct感受态细胞，挑取单菌落并扩大培养，在无菌条件下提取质粒。将提取的质 粒线性化爝调整至合适浓度，转染RK-13细胞，经过(3418加压培养，以有限稀释法 免疫组化等方法鉴定，诞实NSI蛋囊在细胞内爵获褥稳定表达。本研究为深入探讨 NSl蛋自作用机制提供了可能性，为研究JEV的致病枫理和免疫枫铡奠定了基础。 目前l瞄床上传统的疆诊断方法有一定局限性，如溺来检测JEV抗体的酶联免疫 吸附试验(ELISA)是建立在抗体和抗原褶结合的基础上，爵能导致非特异性反应，进 丽霹麓导致特异性抗体缀难被检寓或凌现假阳性结果。本研究以上述细臆系为靶细 胞，通过朴体介导的缨胞毒镶试验(CDC)成功建立了一种毅型豹检测抗NSl矮自抗体 的方法。该方法有较离的灵敏度、特异度翻敏感性，具有比ELISA方法更好的准确 度。由于露前广泛疲用的灭活疫苗不能诱导机体产生抗NSI蛋巍的抗体，因丽该方 法也为区别盎然感染和人工免疫提供了理想手段，对J料的流行病学研究其有重要 意义。 关键词；乙型脑炎病毒；NSl蛋白；细胞系；孝}体介导的细腿毒性试验 Establishmentof NSl celllineof virus stablyexpressingprotein Japaneseencephalitis Master Zhenshi candidate：Chen Advisor：．Prof．WangEnqiang Medicine Major．ClinicalVeterinary Abstract aseriouszoonosiscaused virus Japaneseencephalitis(JE)is byJapaneseencephalitis virus ofthe Flaviviridaeincludes (JEV)。砀eJapaneseencephalitisserocomplexfamily WestNile Louis virus(WNV)，Saintencephalitisvirus(SLEV)andMurrayValley distributesinEastandSouthAsia．Asa encephalitisvirus(MWV)．JEVwidely membr