绵羊肺腺瘤病毒a基因的克隆表达及间接竞争elisa方法的建立.pdfVIP

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2016-02-20 发布于贵州
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绵羊肺腺瘤病毒a基因的克隆表达及间接竞争elisa方法的建立.pdf

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绵羊肺腺瘤病毒a基因的克隆表达及间接竞争elisa方法的建立

皇量葛置墨暑量置量曼皇鼍曼舅鼍喜皇皇曼曼曼曼曼曼曼皇曼曼曼曼皇曼曹-‘ZMK公n■ 目录中文摘要………………………………………………………………………………………………I 英文摘要………………………………………………………………………………………………III 1前言…………………………………………………………………………………………………………………………………．1 1．1流行病学…………………………………………………………。………………………………．．1 1．2临床症状……………………………………………………………………………………………l 1．3 oPA的病理解剖!学变化…………………………………………………………………………l 1．3．1非典型OPA病例解剖学变化………………………………………………………………．1 1．3．2典型oPA病例解剖学变化………………………………………………………………．2 1．4JSRV致病原的鉴定………………………………………………………………………………．．2 1．5JSRV基冈组………………………………………………………………………………………。2 1．6JSRV的复制………………………………………………………………………………………………………………………3 1．7内源性JSIW……………………………………………………………………………………………………………………．．4 1．8JSRV的嗜组织性…………………………………………………………………………………．．5 1．9致瘤机理……………………………………………………………………………………………．．5 1．10JSRV检测方法的研究进展………………………………………………………………………5 1．11研究的目的与意义………………………………………………………………………………．．6 2材料与方法…………………………………………………………………………………………7 2．1材料………………j…………………………………………………………………………………………………………………7 2．1．1病毒、微生物材料及待检样品来源………………………………………………………7 2．1．2菌株和载体…………………………………………………………………………………7 2．1．3主要试剂……………………………………………………………………………………7 2．1．4主要试剂配制………………………………………………………………………………8 2．1．5仪器设备…………………………………………………………………………………．．9 2．2试验方法…………………………………………………………………………………………一10 2．2．1病料组织DNA的提取…………………………………………………………………。lO 2．2．2引物设计…………………………………………………………………………………10 2．2．3CA基冈的克隆……………………………………………………………………………………………．10 2．2．4重组表达质粒的构建．．．…………………………………………………………………．12 2．2．6表达条件的优化…………………………………………………………………………．14 2．2．7重组蛋白6CA66028a1的人鼙表达与纯化……………………………………………．．15 2．2．8重组蚩白6CA66028al的westemblot印迹……………………………………………15 2．2．9动物的免疫………………………………………………………………………………．15 2．2．10多抗的纯化……………………………………………………………………………．．16 2．2．11多抗的westemblot印迹………………………………………………………………．．16 2．2．12抗原、封口j液、一抗、二二抗间交义反应的测定………………………………………17 2．2．13最佳抗原及抗体’I：作浓度的确定………………………………………………………17 2．2．1 7 4间接竞争ELISA测定的基本实验步骤………………