脂质体介导har转染绵羊胎儿成纤维细胞的研究.pdfVIP

脂质体介导hALR转染绵羊胎儿成纤维细胞的研究 姓 名：黄兰兰(动物遗传育种与繁殖) 指导老师：石囤庆研究员 摘 要 本文以脂质体介导法转染绵羊胎儿成纤维细胞(sFFcs)，寻找影响脂质体介导转染 sFFCs效率的因素，以期提高转染效率，为转基因绵羊生物反应器打下基础。 首先成功建立了30天绵羊胎儿成纤维细胞培养体系及优化的转染方法，在此基础上 状进行分析结果如下： 1．培养细胞形态为典型的成纤维状，可根据对胰蛋白酶的敏感度不同，将其纯化。 2．绵羊胎儿成纤维细胞的生长曲线均呈“s”型，细胞经历了潜伏期、指数生长期 和平台期。 3．细胞冷冻实验结果显示，绵羊胎儿成纤维细胞用DMSO(1096)冷冻，细胞存活 状态良好，说明本研究中所采用冷冻保护剂适合于sFFCs的长期冷冻保存。 4．染色体核型分析绵羊的二倍体染色体数目为2n=54，在本研究培育体系中能保持 二倍体性状，遗传性状稳定，可以使绵羊遗传资源在细胞水平长久保持下来。 因在培养细胞中的表达，转染效率与细胞汇合度、质粒DNA和脂质体的浓度比例、转染 时间及G418浓度相关。实验中当细胞汇合度达到3096～60％时，用3．0pl脂质体介导 转染率可达到46％。 关键词：胎儿成纤维细胞；脂质体；转染；绵羊 论文类型：b应用研究 StudiesonhALR embryonic transfectingsheep cellmediated byliposome Huang M．Agr．Candidate：Lanlan field：Animal and reproduction Study genetics，breeding Shi Adviser：Researcher Guoqing Abstract affectedtlletransfactionand Inour studiedhowthef融ofs efficiency experiments．we Oil fibroblastscellsinorderto whateffectsthe methodtook sheepembryomc liposome increasetmnsfactionand for reactor, biology efficiencygrandsheep 1．Invitroculture of fibroblasts(sFFCs)and systemsheepembryomc methodWaS inthis lineof investigatedstudy．cell sheep established of30th was46％ofcells byembryo sheepsuccessfully．Moreover,there transfected use condition