表达h5n1禽感病毒ha基因重组腺病毒的构建及免疫保护性研究.pdfVIP

目 录 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………………I 英文摘要………………………………………………………………………………………．III 1前言……………………………………………………………………………………………1 1．1禽流感病毒概况…………………………………………………………………………．．1 1．1．I禽流感病毒的结构特点………………………………………………………………1 1．1．2病毒病原性的决定因素………………………………………………………………2 1．1．3 H5N1亚型高致病性禽流感病毒的发展历史及现状…………………………………3 1．2禽流感疫苗的研究进展…………………………………………………………………．3 1．2．1细胞源性全病毒灭活疫苗……………………………………………………………3 1．2．2 VLPS疫苗……………………………………………………………………………………………………．4 1．2．3 DNA疫苗………………………………………………………………………………………………………4 1．2．4病毒活载体疫苗………………………………………………………………………4 1．3腺病毒表达系统…………………………………………………………………………．6 1．3．1腺病毒的结构及感染机理……………………………………………………………6 1．3．2腺病毒表达系统的构建………………………………………………………………7 1．3．3腺病毒载体的优点……………………………………………………………………9 1．3．4腺病毒表达系统在禽流感疫苗中的应用……………………………………………．9 1．4研究的目的和意义………………………………………………………………………10 2材料与方法…………………………………………………………………………………．11 1 2．1试验材料………………………………………………………………………………．．1 2．1．1病毒株、菌株、细胞与实验动物…………………………………………………．1l 1 2．1．2载体和疫苗…………………………………………………………………………1 1 2．1．3生物学试剂…………………………………………………………………………1 2．1．4主要仪器……………………………………………………………………………11 2．1．5分子生物学软件……………………………………………………………………12 2．2试验方法…………………………………………………………………………………12 2．2．1PCR引物设计与合成………………………………………………………………．12 2．2．4重组腺病毒rAd．HA的制备…………………………………………………………15 2．2．5重组腺病毒rAd．HA的鉴定…………………………………………………………16 2．2．6重组腺病毒的浓缩纯化及滴度测定………………………………………………．．17 2．2．7 8 2．2．8 l 3结果………………………………………………………………………………………………………………………．．2 3．1重组质粒的构建及鉴定…………………………………………………………………2l 东北农业大学农学硕士学位论文 3