豚鼠气单胞菌胶金免疫层析快速检测试纸条的研制.pdfVIP

独创性声明 本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独 立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致 谢中己作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。 与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢 意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 日期：埘∥I 学位．(毕业)论文作者亲笔签名：享言t曰疗 f夕 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。 口 学位(毕业)论文作者亲笔签名： 丰、志矽司 日期：w多．f夕 指导教师亲笔签名：匀∥砺彩 日期：硼∥．／7 福建农林大学硕士毕业生论文 豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制 中文摘要 豚鼠气 豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae)是水产养殖常见的细菌性病原体， 单胞菌病具有流行广、发病快、死亡率高等特点，常常造成养殖渔业的巨大经 济损失，严重危害渔业及其它水产业的发展。目前国内外有关豚鼠气单胞茵鱼 病的的诊断主要依靠临诊病理观察及细菌学鉴定，两种方法在准确性及检测速 度上均有一定限制。鉴于此，本文采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒， 选择20nm的胶体金颗粒，标记抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体并制备胶体金垫。将 胶体金垫、喷涂有豚鼠气单胞菌兔多克隆抗体和羊抗鼠抗体的硝酸纤维素膜、 样品垫及吸收垫等组装成免疫层析试纸条，建立豚鼠气单胞菌的快速检测方法。 用灭活细菌与血清混合的模拟样本测定试纸条的特异性、灵敏度。结果显示， 试纸条对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌等7种常见病原菌均无交叉反应，与豚 鼠气单胞菌显示特异反应，检测灵敏度为106cfu．ml一，显示时间小于5min。研 制的豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析检测试纸条具有快速、简便、特异性高、适 用于基层临床生产推广应用。为豚鼠气单胞菌病的检测及防治提供新的技术方 法。具体实验方法及结果如下：． (1)通过动物免疫、细胞融合、筛选、克隆化及利用ELISA检测技术，制 备并鉴定抗豚鼠气单胞菌的单克隆抗体(mAb)。共得到3株能稳定分泌mAb 5．12×10～；交叉实验结果显示各株单克隆抗体与气单胞菌属内另两种常见致鱼 病性细菌嗜水气单胞菌、温和气单胞菌，以及其他四种常见致病性细菌鳗弧菌、 迟缓爱德华茵、创伤弧菌、溶藻弧菌等均不发生交叉反应，表明所制备的各株 单克隆抗体均具有较好的特异性，可用于豚鼠气单胞菌的检测及进一步的研究。 (2)采用柠檬酸三钠法制备了20nm的胶体金颗粒，并对1F10抗豚鼠气单 胞菌单克隆抗体进行胶体金颗粒标记，形成金标抗体。金标抗体喷涂在玻璃纤 福建农林大学硕士毕业生论文 维素膜上，干燥制备释放性好、生物活性高的金标抗体结合垫。 (3)将抗豚鼠气单胞菌多克隆抗体与羊抗鼠抗体分别喷吐在硝酸纤维素膜 的检测线和质控线位置，并对空白位点封闭，干燥，制备免疫硝酸纤维素膜。 (4)试纸条的组装：将金标抗体结合垫、免疫硝酸纤维素膜、样品垫、吸 收垫依次重叠粘在不干胶底板上，裁成小条，密封包装成免疫层析试纸条。 (5)试验条的检测应用：在样品垫上滴加样品，样品在毛细吸附作用下向 前层析迁移，在层析