金黄色葡萄球菌ap基因克隆表达及双重pcr检测方法建立.pdfVIP

摘 要 目的： 1．构建鹅源金黄色葡萄球菌eap靶基因原核表达载体，并初步研究目的蛋白的免疫 学活性及其应用。 2．金黄色葡萄球菌eap靶基因双重PCR检测方法的建立。 方法： 因片段，将纯化回收后的目的片段克隆到pMDl8一TVector载体上，经实验室PCR扩增 和单双酶切鉴定，鉴定正确后测序分析。测序分析『F确后构建pET28a—eap重组质粒 i 并转化到大肠杆菌E．col 方法检测重组Eap蛋白的免疫活性。建立间接ELISA方法，研究目的蛋白的反应原性。 由临床采集并分离的细菌。首先对临床采集的100株标本进行分离纯化并根据生物学 特性进行大致区分。通过国际公认的葡萄球菌特异性基因16srRNA与金黄色葡萄球 菌特异性eap基因序列双重分析法鉴定，其中有57株为目的菌。 结果： 得小量纯化的Eap重组目的蛋白。 2．成功应用葡萄球菌特异性基因16s rRNA和金黄色葡萄球菌特异性eap基因为检测 靶点，建立一种能快速灵敏的检测病原菌的双重PCR检测方法。 结论： 1．在pET28a系统中成功表达了Eap融合蛋白并小量纯化，为进一步研究其生物学活 性及临床诊断治疗奠定相关的理论基础。 2．应用eap基因作为一种具体的诊断工具用于标识目的致病菌。为从分子水平上快 速鉴定病原菌提供了简单、快速、准确的方法。 关键词：金黄色葡萄球菌；禽葡萄球菌病；原核表达；间接ELISA；多重PCR The and of AureusGene CloningExpressionStaphylococcusEap andtheEstablishmentofDoublePCRDetectionMethod Abstract Purposes： 1．Toconstruct for Prokaryotic Vector of Expression captargetgenesStaphylococcus aureusin onthe of source，and study geese preliminary immunologicalactivitytarget andit’S proteins application． 2．Toestablish doublePCR for of technology testingtargetgenecap． Methods： to full informationonthe 1．Accordingcap lengthgene Genebank，amplifycapgene fromInner Goose—derivedisolates clonedthe fragment Mongolian byPCR，and purpose to 18一TVectorafter and itwillbesendtodo clipspMD purificationrecovery，and to afteridentifiedbecorrect PCR and sequencinganalysis byLaboratoryamplification