aβlt;,-42gt;寡聚体特异性scfv的筛选、鉴定和亲和力成熟的初步研究.pdf

摘 要 老年性痴呆(Alzheimer’sdisease，AD)是一种渐进性神经退行性疾病，其病理特 征是渐进性的老年斑沉积，神经突触丢失和神经纤维缠结，临床表现为记忆功能衰减 及识别能力障碍，同时伴有各种神经症状和行为障碍。在老年人群，．具有非常高的发 病率，目前还没有特异性治疗药物。近年来AD的发病机理和药物研究方面都有突破 beta 性进展，尤其是制备针对13淀粉样蛋白(amyloidprotein，AI))特异性抗体药物 成为AD治疗极具价值的途径。 噬菌体展示技术(phagedisplay)为抗体制备开创了一条简便、快速的基因工程 抗体制备方法。噬菌体抗体是在噬菌体表面表达抗体分子的抗原结合片段(Antigen chain variable，scFv)，单链抗体 bindingframlaent，Fab)或单链抗体(singlefragment 具有分子量小，免疫原性低，穿透力强，定位迅速，易于基因工程制备和改造等优点。 通过构建和筛选人源性天然噬菌体抗体库，得到AB寡聚体特异性人源性单链抗体。 可直接应用于人AD的治疗。 利用噬菌体展示技术构建人源性天然抗体库，以可溶性A131．42寡聚体对抗体库进 行筛选获得针对低分子量AI)I．42寡聚体的特异性单链抗体。分离10个健康人外周血 对抗体库进行四轮筛选，ELISA法筛选特异性识别ABl．42寡聚体的阳性克隆，将筛选 HB215 到的阳性克隆B19转化至Ecoli 导表达了重组抗体B19．Fab。SDS．PAGE及WesternBlot分析结果显示，重组抗体 寡聚体特异性结合活性。对单链抗体亲和力成熟进行的初步研究为后续的打下了良好 的基础。本实验中获得的AI)l-42寡聚体特异性单链抗体为老年性痴呆症(AD)的临 床治疗研究奠定了基础。 关键词：老年性痴呆：A131-42寡聚体：人源性天然抗体库：单链抗体：可溶性表达： 抗体亲和力成熟 and of Selection，IdentificationstudyAffinity preliminary MaturationofscFv SpecificAgainstA13,．42Oligomers Abstract AIzheimer’S themost diseaseIntheelder． disease(AD)iSprevalentneurodegeneratiVe Thediseaseis current characterized and obstacle．The bymemoryimpairmentcognitive treatmentsofAD reliefandare provideonlysymptomatic antibodieshavebeen asa forthetreatment anti-A13 potentialtherapeuticstrategy suggested ofAD． Genetic madeit tO withoutconstant engineeringpossiblegenerateantibody region whichistermed chain scFv(si