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h9亚型禽流感毒ha基因重组禽痘病毒的构建
目录
中文摘要……………………………………………………………．．1
ABSTP认CT．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2
英文缩写词表……………………………………………………………．3
前言……………………………………………………………………4
1禽流感病毒概述…………………………………………………………5
2禽流感病毒分子生物学研究进展……………………………………………．7
3聃亚型禽流感流行现状…………………………………………………．14
4禽流感疫苗……………………………………………………………15
5禽痘病毒载体研究进展…………………………………………………．．18
试验一目的基因的克隆及序列分析…………………………………………．．23
l试验材料……………………………………………………………。。23
2试验方法……………………………………………………………．．24
2．1引物设计与合成………………………………………………………24
2．2病毒的分离…………………………………………………………．24
2．3病毒眦的提取………………………………………………………24
2．4eDNA的制备…………………………………………………………25
2．5PCR扩增……………………………………………………………25
2．6琼脂糖凝胶电泳………………………………………………………25
2．7P僳扩增产物的回收…………………………………………………。．25
2．8目的片段与载体的链接…………………………………………………26
2．9感受态细胞的制备……………………………………………………．26
2．10连接产物转化………………………………………………………．27
2．11破裂解法小量提取质粒………………………………………………．．27
2．12重组质粒的鉴定……………………………………………………．．28
3结果与分析……………………………………………………………28
3．1RT-PCR扩增…………………………………………………………28
3．2重组质粒的酶切鉴定…………………………………………………．．29
3．3m基因序列测定及分析…………………………………………………29
3．3．1分离株IIA基因与其他毒株的核苷酸序列的同源性分析………………………．．30
3．3．2分离株IIA基因的遗传进化关系分析………………………………………30
4讨论…………………………………………………………………32
4．1HA基因的扩增及克隆…………………………………………………．32
4．2卧基因的序列分析……………………………………………………32
5小结…………………………………………………………………32
试验二重组病毒的构建……………………………………………………33
1试验材料……………………………………………………………．．33
1．1主要试剂……………………………………………………………33
1．2质粒及菌株…………………………………………………………．33
1．3主要溶液配方………………………………………………………．．33
1．4引物合成……………………………………………………………34
2试验方法……………………………………………………………．．34
2．1转移载体的构建………………………………………………………．34
2．2重组质粒的转染………………………………………………………39
2．3重组病毒的筛选与纯化…………………………………………………40
3结果与分析……………………………………………………………41
3．1
3．2重组质粒限制性内切酶酶切鉴定…………………………………………．42
3．3重组病毒的鉴定………………………………………………………46
4讨论…………………………………………………………………48
5小结…………………………………………………………………50
全文总结………………………………………………………………．51
参考文献………………………………………………………………．52
致谢…………………………………………………………………．．58
Contents
Chinese
abstract．……………．．．．．
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