o型口蹄疫与伪犬病二价基因工程疫苗的研究.pdfVIP

摘 要 andMouthDisease andMouthDisease 口蹄疫(Foot FMD)是由口蹄疫病毒(Foot Virus FMDV)弓I起的偶蹄动物急性、热性、高度接触性传染病，是危害畜牧业最严 重的传染病之一，也是造成家畜及其产品国际贸易受阻的重要疾病，被国际兽医局 (OIE)和联合国粮农组织(FAO)在国际动物卫生法典中列为18种A类传染病之一， 近年又被列为重大跨国动物疫病的全球消灭计划及生物武器安全公约组织重点检查 对象。中国政府公布的《动物病原微生物分类明录》将口蹄疫病毒列为十种一类动 I和南非SATI、SAT2、SAT3， (Aphthovirus)，有七个血清型，分别为A、O、C、Asia 每种血清型里又可分为许多亚型，不同血清型之间没有交叉保护力，其中O型口蹄 疫分布最广，在非洲、南亚、中东和南美许多国家广泛分布，在我国的口蹄疫病例 大多都是O型口蹄疫。免疫预防接种是控制乃至消灭口蹄疫的主要措施，目前使用 O型口蹄疫灭活疫苗预防该病，取得了一定的效果，但是仍需改进。 本研究以伪狂犬病毒(Pseudorabies 体，融合表达具有免疫增强作用的牛疱疹病毒I型VP22基因和O型FMDV的主 要抗原基因P1或Pl／2～3C，构建了基因工程二价疫苗株，达到一针预防两种疾 及猪口蹄疫O型灭活疫苗的免疫效果。 序列分析 阅读框架融合，首先设计一对分别含有Hin棚和DRV酶切位点的上、下游引物， 从含有牛疱疹病毒I型VP22基因的重组质粒中扩增出不含终止密码子的牛疱疹病 毒I型VP22基因编码区；再用分别含有EcoRV和XbaI酶切位点的上、下游引物， 从含有O型FMDV P1基因和P1／2A／3C基因的重组质粒中分别扩增出不含起始密码 一致。 2．共表达牛疱疹病毒I型VP22基因和O型口蹄疫病毒主要免疫原性基因的 DNA疫苗的构建及其免疫原性的效果 I酶切 I酶切位点之 后凝胶回收，回收片段分别定向克隆到pcDNA．VP22的EcoRV和Xba 四种DNA疫苗均产生了可以检测到的FMDVELISA抗体和中和抗体；含VP22的 与FMDV灭活疫苗单独免疫没有显著差异(PO．05)。淋巴细胞增殖试验结果显示， DNA疫苗诱导细胞免疫的水平远远高于FMDV灭活疫苗(Po．05)。 3．共表达牛疱疹病毒I型VP22基因和O型口蹄疫病毒多抗原表位的重组伪狂 犬病毒的构建及其免疫应答 pIECMV-VP22-P1／2A／3C。以PRVTK／gE／LacZ+为亲本株，分别构建了融合表达 经空斑纯化、PCR和Southern杂交鉴定，获得了纯化的病毒。Westemblot证实 稳定性和增殖滴度。用该重组病毒免疫Balb／c小鼠，并与亲本株和O型口蹄疫灭活 TK-／gE／VP22．P 疫苗免疫组的抗体水平相当，显著不差异(PO．05)，说明利用伪狂犬病毒融合表达 VP22．P1和VP22．P1／2A／3C能激发很好的免疫反应。 综上所述，本研究成功构建了融合表达牛疱疹病毒I型VP22基因与O型口蹄 疫病毒P1基因或P1／2A／3C基因的DNA疫苗和重组伪狂犬病毒重组疫苗，并利用 Balb／c小鼠为模型对不同疫苗的免疫原性进行了比较，为口蹄疫新型疫苗的研究提 供了基础。 关键词：口蹄疫病毒；牛疱疹病毒I型；DNA疫苗：重组伪狂犬病毒；VP22 基因；P1基因；P1／2～3C基因 2 ABSTRACT disease Foot-and—mouth Foot—and—mouth thecausativeof virus(F／vIDV)isag