prrsv变异的分离鉴定及生物学特性的研究.pdf

摘 要 2006年6月以来，安徽省部分地区及周边省市猪暴发了以发热、厌食、眼 结膜炎等为主要症状，以高热、高发病率、高死亡率为主要特征的猪急性传染病， 即所谓的“猪高热病”。通过血清学和分子生物学检测表明，发病猪多为双重或三 重以上感染，常见的混合感染病原为猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、圆环病毒2型、 伪狂犬病、链球菌等。病因调查结果显示，这次“猪高热病”流行是由猪繁殖与呼 吸综合征病毒(PRRSV)变异株引起高致病性蓝耳病。为追溯“猪高热病”猪群中 PRRSV流行毒株的来源和变异原因，探索“猪高热病”预防与控制措施，本研究 致病性试验，分析了我省PRRSV流行株与国内外己发表的其它毒株间的遗传变 异关系。研究结果为探索我省“高热病”猪群中PRRSV流行株的来源、分子流行 病学和变异情况等提供科学依据，为“猪高热病”的诊断和防制奠定理论基础。 1．将采自舒城、定远、肥西、宿州、黄山等县市的不同猪场持续发热的60 份发病猪的肺脏、脾和淋巴结等组织病料用RT-PCR进行PRRSV检测，筛选阳 性样品经处理后接种到Marc-145细胞，能产生明显的细胞病变，电镜观察可见 直径50—80nm的有囊膜病毒粒子，与美洲型PRRSV阳性血清进行间接免疫荧光 试验可见特征性荧光；RT-PCR检测可见目的条带，证实分离的5株病毒为 PRRSV，分别命名SCH07、DY07、FX07、SZH08、HSH08。 分离株的Nsp2都发生30个氨基酸的不连续缺失，缺失位置与JXAI株完全一致； 因的核苷酸同源性，与2006年后的新分离株尤其是HuBl株同源性最高，核苷 酸同源性分别在96．8％以上。根据Nsp2基因高变区、ORF5全基因所建立的遗 传系统发育树可知这5株PRRSV流行株之间的亲缘关系很近，与江西、湖北等 2省的PRRSV流行株由同一毒株演化而来，同属美洲型。 康猪2头，并设阴性对照组。通过测量体温、临床症状、大体病变、病理切片观 察、RT-PCR、ELISA抗体检测等方法分析其病毒致病性。结果表明：接种病毒 猪出现高热、呼吸障碍等典型“猪高热病”的临床症状，试验猪剖检均出现以心叶、 尖叶为主的灶性暗红色实变为特征的肺脏病变；病理切片显示了间质性肺炎等符 合猪繁殖与呼吸综合征的病理变化，RT-PCR、ELISA抗体检测均为阳性。证实 了分离的病毒为PRRSV变异株，其中接毒组有一头猪死亡，说明PRRSV变异 株的致病力增强。也佐证了PRRSV变异株是“猪高热病”的主要病原之一。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；变异株；分离鉴定；序列分析：致病性 Abstract A disease feverdisease”，whichmorethan severe pig designatedas“high spread 20 inChinain economiclosses．The provinces 2006，causedgreat infringedpigs thecommonclinical suchas oftheskinora experienced symptomsreddening purple colorinthe ofthe andextensive in ears，edema eyelids，conjunctivitishemorrhage with incidenceand this pigletshigh mortality．Instudy,the pre-weaning epidemic strainsof and isolated porcinereproduct