sip蛋白高亲性噬菌体介导的牛源无乳链球菌间接elisa方法的建立.pdf

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sip蛋白高亲性噬菌体介导的牛源无乳链球菌间接elisa方法的建立

目 录 ㈣Y㈣盯㈣一 ㈣堕 叭7一 一 目 录 摘要…………………………………………………………………………………………………….‘……………………………I 英文摘要………………………………………………………………………………………….III 1前言………………………………………………………………………………………………1 1.1奶牛乳腺炎概述…………………………………………………………………….1 1.2无乳链球菌研究进展……………………………………………………………….2 1.2.1无乳链球菌简介………………………………………………………………..2 1.2.2无乳链球菌表面蛋白研究进展…………………………………………………2 1.2.3无乳链球菌主要毒力因子研究进展……………………………………………5 1.2.4无乳链球菌的检测方法…………………………………………………………7 1.3噬菌体展示技术的概述…………………………………………………………….8 1.3.1噬菌体展示技术的基本原理及类型………...………………………………….9 1.3.2噬菌体展示技术的应用……………………………………………………….10 l 1.4研究目的及意义……………………………………………………………………1 2材料与方法…………………………………………………………………………………….12 2 2.1实验材料…………………………………………………………………………..1 2.1.1菌种载体及质粒………………………………………………………………12 2.1.2工具酶、试剂盒和抗体试剂………………………………………………….12 2 2.2实验方法…………………………………………………………………………..1 2 2.2.1引物设计………………………………………………………………………1 2.2.2质粒提取………………………………………………………………………12 2.2.3目的基因的扩增………………………………………………………………12 2.2.4目的序列与载体的连接与鉴定……………………………………………….13 2.2.5无乳链球菌Sip重组蛋白的诱导表达…………………………………………13 3 2.2.6蛋白的纯化…………………………………………………...……………….1 3 2.2.7蛋白的复性…………………………………………………………………….1 2.2.8噬菌体的筛选…………………………………………………………………14 2.2.9噬菌体蓝斑的扩增及滴度测定……………………………………………….14 2.2.11间接ELIAS检测方法的建立………………………………………………..15 3结果与分析…………………………………………………………………………………….17 3.1原核表达…………………………………………………………………………..17 3.1.1无乳链球菌Sip基因的亚克隆………………………………………………..17

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