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sip蛋白高亲性噬菌体介导的牛源无乳链球菌间接elisa方法的建立
目 录 ㈣Y㈣盯㈣一 ㈣堕
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目 录
摘要…………………………………………………………………………………………………….‘……………………………I
英文摘要………………………………………………………………………………………….III
1前言………………………………………………………………………………………………1
1.1奶牛乳腺炎概述…………………………………………………………………….1
1.2无乳链球菌研究进展……………………………………………………………….2
1.2.1无乳链球菌简介………………………………………………………………..2
1.2.2无乳链球菌表面蛋白研究进展…………………………………………………2
1.2.3无乳链球菌主要毒力因子研究进展……………………………………………5
1.2.4无乳链球菌的检测方法…………………………………………………………7
1.3噬菌体展示技术的概述…………………………………………………………….8
1.3.1噬菌体展示技术的基本原理及类型………...………………………………….9
1.3.2噬菌体展示技术的应用……………………………………………………….10
l
1.4研究目的及意义……………………………………………………………………1
2材料与方法…………………………………………………………………………………….12
2
2.1实验材料…………………………………………………………………………..1
2.1.1菌种载体及质粒………………………………………………………………12
2.1.2工具酶、试剂盒和抗体试剂………………………………………………….12
2
2.2实验方法…………………………………………………………………………..1
2
2.2.1引物设计………………………………………………………………………1
2.2.2质粒提取………………………………………………………………………12
2.2.3目的基因的扩增………………………………………………………………12
2.2.4目的序列与载体的连接与鉴定……………………………………………….13
2.2.5无乳链球菌Sip重组蛋白的诱导表达…………………………………………13
3
2.2.6蛋白的纯化…………………………………………………...……………….1
3
2.2.7蛋白的复性…………………………………………………………………….1
2.2.8噬菌体的筛选…………………………………………………………………14
2.2.9噬菌体蓝斑的扩增及滴度测定……………………………………………….14
2.2.11间接ELIAS检测方法的建立………………………………………………..15
3结果与分析…………………………………………………………………………………….17
3.1原核表达…………………………………………………………………………..17
3.1.1无乳链球菌Sip基因的亚克隆………………………………………………..17
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