tcdca对佐性关节炎模型大鼠的治疗作用及其作用机制研究.pdf

摘 要 类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis ，RA ）是一种慢性自身免疫性疾病， 伴随着复杂的炎症介质导致关节的损害、滑膜炎症、软骨和骨的损坏，导致人类 和动物严重的机体功能障碍。尽管 RA 的病因及发病机制尚未完全明确，但其主 要的病理过程环节基本清楚，即免疫功能失调、关节滑膜组织增殖增厚、软骨与 骨破坏等三个方面。目前尚缺乏真正有效而副作用小的治疗药物，因此，寻找作 用显著、副作用小的天然活性成分逐渐成为 RA 药物的研究热点。 牛磺鹅去氧胆酸（Taurochenodeoxycholic Acid ，TCDCA ）是动物胆汁酸中 具有生物活性的主要有效成分之一，从动物胆汁酸中分离提取纯化的 TCDCA 对 动物机体的急、慢性炎症均有显著的抑制作用；对机体的体液免疫、细胞免疫和 吞噬功能均有显著的调节作用。在前期研究的基础上，本研究以佐剂性关节炎 (adjuvant arthritis, AA)大鼠为对象，观察了具有较高抗炎免疫调节活性的 TCDCA 的抗类风湿性关节炎作用，同时从影响 AA 模型发展的关键细胞因子和核转录因 子-κB （NF-κB ）活性方面探讨了其治疗 AA 模型可能的药理作用机制，为将其 开发为治疗 RA 的新药奠定实验基础。 本课题的主要研究内容包括以下五个方面： （1）AA 模型大鼠的建立与评价 通过比较常用关节炎动物模型的诱导方法，本研究优化筛选出了高成功率、 临床症状典型、稳定的诱导 AA 模型的方法。通过关节炎动物模型的评价标准， 本试验建立的 AA 模型大鼠，造模 15d 时模型大鼠的对侧脚踝关节、足跖部出现 明显的肿胀、四肢爪子表面出现红斑、尾根明显肿胀结节，对侧脚的肿胀率达到 25.15% ，随着时间的延长对侧脚踝关节、足跖部肿胀率不断增大；造模 30d 时大 鼠的四肢严重肿胀、尾巴出现明显结节，关节炎指数达到 14.25，对侧脚的肿胀 率达到 48.09% ，X-ray 拍片显示骨骼之间界限模糊，骨密度降低，踝关节部和趾 部软组织明显增厚。通过 3 次重复试验显示，本实验建立的 AA 模型较为稳定， 成功率均在 80% 以上。 （2 ）TCDCA 对 AA 模型大鼠的治疗作用 AA 模型大鼠连续灌胃给药高低剂量 TCDCA （0.2g/kg.b.w、0.1g/kg.b.w ）14d 后，根据模型评价标准对给药前后的关节炎动物模型进行了评价。结果：模型大 鼠锐减的体重得到显著性的恢复，增重率分别由 25.57%提高到 44.41% 、46.02% ； 模型大鼠四肢及尾根呈现的红斑、肿胀得到一定程度的缓解，关节炎指数分别由 13.38 降为 10.44、10.03；模型大鼠对侧脚肿胀率分别由 50.17%降为 47.96% 、 45.83% 。通过X-ray 观察，模型大鼠两后肢踝关节和趾部骨骼的明显肿大，趾部 各骨骼之间界限模糊，骨密度降低，踝关节部和趾部的软组织明显增厚等特征均 得到一定程度的减轻。以上结果显示TCDCA 对 AA 模型大鼠呈现出良好的治疗 作用。 （3 ）TCDCA 对 AA 模型大鼠体内关键细胞因子的影响 通过 ELISA 法和 RT-PCR 技术分别检测了 AA 模型大鼠血清和滑膜组织中 细胞因子 TNF-α、IL-1β、IL-6 和 IL-10 蛋白和 mRNA 水平的表达。结果，分别 灌胃给药 AA 模型大鼠高低剂量 TCDCA （0.2g/kg.b.w,0.1g/kg.b.w ）14d 和 31d 后，TCDCA 可显著的抑制 AA 大鼠血清中过度分泌的 TNF-α、IL-1β、IL-6 蛋白 和滑膜组织中 mRNA 水平的表达(P0.05) ；高剂量（0.2g/kg.b.w ）TCDCA 连续 给药 31d 后可显著的提高模型大鼠血清中 IL-10 的含量和滑膜组织 mRNA 水平 的表达量(P0.05) 。 （4 ）TCDCA 对 AA 模型大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS ）和腹腔巨噬细胞 （PMΦ ）中关键细胞因子的影响 采用组织块培养法获得形态典型、单一的 FLS 细胞。采用 ELISA 法检测了 AA 模型大鼠 FLS 细胞上清液中细胞因子 TNF-α、IL- 1β、IL-6 和 IL-10 蛋白的含 量，同时采用 RT-PCR 法测定了相应细胞因子 mRNA 水平表达的变化。结果：