α-半乳糖苷酶态发酵中试技术参数研究.pdf

摘要 通过物理和化学复合诱变处理扬奇青霉(Penicillium janczewslai)．筛选高产a．半乳糖苷 酶(GAL)变异株，从培养的环境因素和培养基组分两方面优化了固态发酵(SSF)产酶条件， 井进行中试生产，探讨了q．半乳糖督酶粗制剂的性质及其在肉鸡日粮中的应用。首先建立了 测定饲用青霉GAL活力的对硝基酚比色法，建议反应液pH为5．5，温度为40C，时间10min， 比色波长405Ⅲn。对出发菌株进行紫外线、甲基磺酸乙酯、亚硝基胍多次重复连续的诱变处 理。获得产GAE活力较高的5个菌株。对菌株连续传代试验以及循环交替培养，筛选获得稳 定产GAL的青霉菌株(Penicillium 合成似半乳糖苷酶在一定程度上仍受葡萄糖阻遏，也受蔗糖、蜜二糖和棉籽糖部分诱导，说 明该菌属于半组成型突变株。三角瓶和托盘SSF试验研究了影响产酶的各种环境因索。结果 表明．培养基的初始适宜pH在5,5～6．5．发酵温度为26～32℃，水分宣控制在55％左右，在 250 mL三角瓶中装曲量为50，7 h时，产Ⅸ．半乳糖苷酶活力最高。托盘发酵研究了 g，培养75 料曲温度和禽水量变化规律，发现随着发酵进程，料曲内部温度可持续升高，水分则减少。 对SSF培养基组分优化结果表明，苹果渣、甜菜渣、甘蔗渣部分替代麸皮时能显著提高酶产 均能显著地提高∞半乳糖苷酶产量。按四因素兰水平正交设计安排试验。结果显示．豆粕、 甜菜渣、硫酸铵和磷酸氢二钾各因素／水平依次为16％、4％、2％和2％时，酶活力达到172 U／g 以上。保持硫酸铵含量不变，选择豆柏、甜菜渣和磷酸氢二铘的二田素／水平进行响应面分析 试验。结果表明，当培养基中含豆柏1920％、甜菜渣3．89％和磷酸氢二钾2．92％时，得到最 高理论酶话力为t74．98 U／g，与实验结果相符。分别在自然状态和调控状态下开展托盘SSF 中间规模试验。结果表明，在自然SSF条件下，酵曲温度和含水量变化幅度较大，酵曲温度 5 最高达到43。C，最后料曲水分损失22％，收获GAL活力为128 U／g；在调控状态下．通过 凋节曲房空气的温度和相对湿度．可以维持相对稳定的温度和含水量，酵曲高峰明温度仅维 3 持在33．5～36．5℃，酵曲水分含量下降幅度较小。最后收获GAL活力达到t66 U／g，比自然 发酵酶活提高了29．4％。通风换气和喷无菌水是调节发酵过程中温度和水分的有效措施。GAL 粗酶制剂稳定pH范暇在3．5～6．5，最适温度50-60C，在70C以下时稳定，经过猪胃肠液仍 能保持活力70％以上．金属离子影响酶活力。GAL对底物(对硝基苯酚一a．D，吡喃半乳糖苷) L-l K。为I．38mmolL’。，V。为2．58mmols一。粗酶制剂中含有其它多种非淀粉多糖酶，在常 温能稳定储存。在玉米．豆柏型日粮中添加GAL对肉鸡营养物质利用、生产性能、血清学参 数雨l器官重量的影响进行了研究。结果表明．GAL能改善日粮代谢能水平和营养物质消化率， 显著提高肉仔鸡早期生长阶段的生产性能，日粮能量与GAL添加水平间存在一定的互作效 应。 关键词：诱变，同态发酵．青霉(Penicilliumsp．)．c【．半乳糖苷酶-中试-饲料 Abstract A wasscreenedfrom hyperproducinga—galactosidaserGAL)strain Penicifliumjanczewskii and