ⅰ群禽腺病毒j株ⅲa蛋白的原核表达及其单克隆抗体的研制.pdf

武敏 l群禽骧病毒，S绦lll8蚤白舔原该表这及其单完隆抗依霹研锈l I群禽腺病毒JS株Ⅲa蛋白的原核表达 及其单克隆抗体的研制 研究生：武敏 导师：秦爱建教授 中文摘要 根据群特异性抗原的不同，禽腺病毒(FowlAdenovirus，ⅣⅣ)属可’ 分为3群：I群、II群和III群。I群禽腺病毒包括从鸡、火鸡、鹅及其 它禽类分离获得的腺病毒。l群禽腺病毒JS株酌l羹a蛋自链子病毒衣 壳的表面，由前体蛋白剪切艏磷酸化而成，每个五邻体基底与5个pIIIa 单体相连。 白核酸序列设计一对引物。SDS．蛋良酶K法提取病毒DNA作为PCR扩 增模板，PCR扩增到1728 bp的特异性条带。将其克隆入pGEX-6p—l原 核表达载体中。经测序验证，获得的序列与CE毛OV硪a蛋白基因进行 比较，结果发现两病毒蛋自基因同源性达到了99．7％。用已构建好的表 与谷胱苗肽S转移酶(GST)融合表达产物，并用W黟le臻南lol进一步 验证，结果证明Ⅲa蛋白获得表达。 通过杂交瘤技术，将用FAV．JS株病毒鸡胚尿囊液免疫的小鼠的脾 细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2怒进行细胞融合，强姐选择性培养基培 养lO天后，将收取的上清与原核表达的IIIa蛋自进行EUSA试验，通 过有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行亚克隆，最终获得了6株能分泌抗 ma蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为FAV—lll鑫-2酗， FAV．1lla．3F8，FAV．1lla．3ElFAV．1lla-4C3， FAV．1lla．384， l， 扬硝太擘硕士论文 2 FAV．IlI敬．6D3。这些单抗的研制为研究该病毒的分子生物学功能提供了 重要的生物材料。 荚键词：禽腺病毒，FAV，lIla，原核表达，单克隆抗体 武敏 l群禽腺病毒js株l程a蛋白的艨核表逶莰其单克隆抗舔的研黼 3 ofⅢaGene Prokal’yoticExpI．ession of Avia娃Ade髓ovirusvirusJSstrain a髓d of重量董eMonoelo娃建l prep魏l’a圣iO薹l A鼗专ibodies琏gains专 Ⅲ鑫 Abs譬r蠢e量 AdenoVi燃s硼鹪稻啦d逾lis 949，w}lich tendency轮in始ctepimel越ceil。 AdenoViridaeisdiVid耐intotwo the MastadenoviridaeaIld genuSes，t11e a砖Si聪e犍舛irid裙 Avi髓eno镊fid辩遮墩霉阳s毒．}毛oweVe≈A涮铋。落蠢d鑫e canbe m． suMiVided幽№e舯ups：groupI，groupII，舯up B粼蠢。珏{融ge辩se畔澈da‰鑫蠹a舯ent1728bp懈粼pli蠢ed姆 FAV王0S。强ere鞭l￡醴PC歉娃。蜊黼拯 PeR粕激蕊g嘲黜of