一种绵羊生殖道菌肽cdna的克隆、真核表达及特性研究.pdfVIP

摘 要 抗菌肽具有广谱的抗菌活性，成为宿主先天免疫的重要组成部分。因其具有抗菌活 性强、抗菌谱广、耐热性好、不易产生耐药性等优点而深受人们的关注。 ORTAP40是从中国美利奴绵羊生殖道分离的一种新型的阳离子抗菌肽，在早期的防 御中起到了重要的作用。在本实验中，根据ORTAP40N端氨基酸序列设计引物，利用 肽，与分离纯化的分子量一致。为得到大量抗菌肽纯品，进一步研究其生物学活性，首 先，参照毕赤巴斯德酵母(Pichia 其次，用Sal 母宿主菌GSl 抗生素筛选高拷贝转化子，以重组毕赤酵母的菌液为模板，进行PCR鉴定，将阳性重 基因，结果显示表达期的酵母细胞中存在ORTAP40 母中存在表达。表达产物经凝胶过滤色谱处理后进行抑菌试验，结果表明产物对白色念 作用。随后，利用高效液相色谱技术对重组表达的ORTAP40进行了定性分析，结果表 明，ORTAP40在巴斯德毕赤酵母表达系统中成功表达。 以上结果表明，本实验成功扩增了一种绵羊生殖道抗菌肽新基因，并构建了绵羊生 了ORTAP40的单独表达，粗制品具有明显的抑菌活性，并利用高效液相色谱技术判定了 目的峰，为进一步研究ORTAP40的抗菌活性、蛋白纯化、产品开发等下游工作奠定了 坚实的基础。 关键词：抗菌肽：ORTAP40；RACE；毕赤酵母；胞内表达 Abstract Antibacterialare innate ofthehost immune peptidesimportantcomponents responses microbicidal have byexertingbroad-spectrumactivity againstpathogenicmicrobes．They attractedattentionforits suchasshoweda antibacterial a great advantages strong activity．has broad antibacterial it is difficultto spectrum，heatstability，and produce resistanceandSOon． oRTAP40isanantimicrobial from isisolatedthe tractof peptide．which reproductive Ovis Merino．Itacentralroleinthe innateimmune aries，Chinese defense plays early against infection．Inthis clonedthe3’end cDNAofORTAP40from study，we full．1ength tractofOvis ofcDNA reproductive aries，usingrapidamplification N—terminusaminoacids elonedtoPMDl8．Tvector．The whichhave