四川白鹅和朗德肝细胞间差异表达基因的筛选及鉴定.pdfVIP

摘 要 Subtractive 抑制消减杂交技术(Suppression 为基础的一种高效寻找差异表达基因的新方法。本研究应用SSH方法筛选四川白鹅和 朗德鹅肝细胞间的差异表达基因，并综合运用生物信息学方法对EST序列进行筛选、 鉴定，由此获得品种间差异相关EST信息。取得了以下主要实验结论： (1)利用改进“Seglen两步胶原酶灌注”法成功分离四川白鹅和朗德鹅肝细 胞。经MTT比色法检测，在第12天细胞活性增加缓慢，在2--3天出现了一定的下降 趋势，但在第3--．5天细胞活性迅速增加，之后细胞活性再次降低，与理论“S型生 长曲线基本符合。 (2)首次应用抑制性消减杂交技术成功构建了四川白鹅与朗德鹅肝细胞间正反 向差异表达cDNA文库，共挑选出了3840个单克隆菌落，插入片段主要分布在 250～750bp之间，呈随机分布，表明文库克隆的插入片断大小与预期的结果相符。SSH．1、 SSH-2文库的有效阳性率分别达到了93％和91％。 (3)应用斑点杂交技术从正反向cDNA消减文库中筛选差异表达的克隆，部分 克隆经检测后，获得了65个在细胞中表达量明显上调的克隆，测序后得到个54个质 量满意的差异EST。 3．7％；全新占EST为3．7％。所得到的已知基因按照基因功能初步分为信号转导与细 胞间通信、细胞结构与运动、物质转运、细胞凋亡、细胞与机体防御、翻译与表达调 控、代谢及其它共8类，其中参与信号转导／细胞间通信和细胞结构的两类基因所占 比例分别为16％和28％，翻译与表达调控的基因占14％，其它功能方面基因所占比 例较低。 (5)肌动蛋白(actin 酸延伸酶基因(ELOVL)、丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶(serine／threoninekinase)、蛋 白翻译起始因子(g祝)等基因在鹅不同性状的表达调控中可能发挥重要作用，有关 这些基因的具体功能、它们的表达调控及其信号通路等还需要进一步研究。 关键词：四川白鹅；朗德鹅；肝脏细胞；抑制性消减杂交：差异表达基因；斑点杂交 and Identificationof Screening differentialyexpressedgenes of during LandesandSichuanWhite hepatocytesgeese geese Zhai and Ning-feng(AnimalGenetics，Breeding Reproduction) Directed Ji·wen byProf．Wang Abstract Subtractive isanewand Suppression Hybridizition effectivemethodtosearch this ofLandes andSichuan differentialyexpressedgenes．In study,thehepatocytes geese White wereisolatedasmaterialstosearch geese betweenthe differentialyexpressed genes twobreeds．The informationabout