小鼠和贵州香猪胎玻璃化冷冻保存相关技术研究.pdf

摘要 为了解决我国动物遗传资源急速衰减及挽救濒危品种提供了新的思路和方法 为胚胎冷冻提供研究方法。本实验对小鼠胚胎玻璃冷冻保存及相关技术进行了系统 的研究，具体内容包括：荧光双色法检测冷冻前后小鼠胚胎活力；不同冷冻方法及 冷冻保存时间对胚胎发育率的影响；冷冻后胚胎细胞损伤检测，并在其基础上对贵 州地方猪种剑白香猪胚胎玻璃化冷冻技术进行初步了的探索。试验结果如下： 荧光物质FDA和PI能对不同活力胚胎进行标记，且在一定浓度范围I为FDA对胚胎 无毒副作用，PI对透明带完整的胚胎也无毒副作用。 胚胎冷冻效果好坏主要取决于玻璃化冷冻液，当玻璃化冷冻液对胚胎有很好的 冷冻保护时，承载工具对胚胎冷冻效果影响不大，当玻璃化冷冻液对胚胎冷冻保护 效果稍差时，承载工具的优越性才得以体现。但是，胚胎冷冻对小鼠桑葚胚的细胞 膜的完整性、细胞内酯酶活性及线粒体分布功能均有影响，只是冷冻效果好的冷冻 方法对细胞膜的完整性、细胞内酯酶活性及线粒体分布的影响小。同时以25％Gly+ 保存1天、10天、20天和30天解冻后对胚胎的发育率没有影响。基于上述研究本实验 mCZB)作为冷冻保护剂的细管法。 处理胚内脂肪后冷冻和直接冷冻两种方法冷冻贵州剑白香猪4一细胞胚胎，解冻后胚 胎存活率都很高，与鲜胚对照组差异不显著。 关键词：小鼠桑葚胚；贵州剑白香猪；4．细胞胚胎；玻璃化冷冻；胚胎活力 4 Abstraot an i To alternativemethodfor ideanDew provide cryopreserVaton，andprov and tot savetherareand animalS．Thewere way endangered studies thought onthe ionofmousemorula performedcryopreservat by wascarriedoutasthe intoa experiment following：researchrapidly determinationofmousemorula oninfluenceofdifferent viability：study methodsanddifferent timetothe of freezing cryopreserVationdevelopmenf mousemorulas：determinetraumataofcellsinfreezing thebase embryo．0n of in Vitrificationmicethe researchsofthevitrifled preliminary inGuizhou werecarried cryopreservationxiangPig on．Theresultofthe asfollow： experiment TheresuitshowsthatFDAandPIcanlabelmousemorulaewhicharein different isinnocuousto andPIisinnoc