少孢节丛孢菌捕器诱导及丝氨酸蛋白酶基因序列分析.pdf

摘 要 捕食线虫性真菌捕食线虫主要是通过其特殊的结构一捕食器来实现的。研究捕食 器菌丝与普通营养菌丝氨基酸含量的区别：并在实验室条件下，用人工方法对捕食器 进行诱导：并对少孢节丛孢菌的丝氨酸蛋白酶基因进行探讨，这对了解捕食器的构造 和捕食过程的机理具有重要意义。为此本课题利用生物化学和分子生物学方法，对少 孢节丛孢菌(丘oligospora)主要进行了以下相关内容的研究，得出结果如下： 研究了氨基酸对捕食线虫性真菌生长的影响，发现不同种类的氨基酸对少孢节 (L-Val)、L一色氨酸、L一蛋氨酸、L一赖氨酸、L一谷氨酸溶液有一定促进作用；而L一 苏氨酸、L一谷氨酸(0．059／L浓度)有明显的抑制作用。 采用多种氨基酸在固体CMA培养基上对少孢节丛孢菌捕食器的产生进行了诱导， 发现加入一定浓度某些种类的氨基酸后，可以导致少孢节丛孢菌产生捕食器，这种捕 食器同样可以捕食线虫幼虫。其中以浓度为0．059／L的L一苯丙氨酸、L一蛋氨酸、DL- 缬氨酸的诱导效果较好；L一苏氨酸、L一异亮氨酸、L一亮氨酸、L一色氨酸和L一缬氨酸 属于中等；L一赖氨酸、L一谷氨酸和L一组氨酸溶液表现较差。而且氨基酸主要刺激新 生菌丝产生捕食器。 通过分析含捕食器菌丝和普通营养菌丝的氨基酸发现：少孢节丛孢菌捕食器(菌 环和菌网)各种氨基酸的含量普遍都高于普通营养菌丝，含捕食器菌丝和普通营养菌 普通营养菌丝二者的化学构成不完全相同，普通营养菌丝在转化成捕食器时，某些氨 基酸的含量发生了改变，在被测样品的各种氨基酸含量中，含捕食器菌丝中以缬氨酸 (Ⅵ也)、亮氨酸(LEU)和苯丙氨酸(PHE)含量较高。 利用特异性引物，对少孢节丛孢菌内蒙古株的丝氨酸蛋白酶基因部分序列进行 了扩增，并同Genbank中其它国内外少孢节丛孢菌株丝氨酸蛋白酶基因相应部分序列 进行了同源性比较构建进化树。结果显示：扩增所得序列全长为l108bp：少孢节丛 孢菌内蒙古株的基因序列与少孢节丛孢菌瑞典株(AY444597)和少孢节丛孢菌云南株 较近，具有较高的亲缘性。迸一步证实了捕食线虫性真菌一少孢节丛孢菌存在不同国 家或地区株的差异。 关键词：捕食线虫性真菌：少孢节丛孢菌：捕食器；氨基酸：丝氨酸蛋白酶：同源性 Inductionof and ofSerineProteaseGene TrapsAnalysis SequenceofArthrobotrysoligospora Abstract Itiswellknownthat nematodes nematode-trappingfungimainlyprey byspecial is toresearchthedifferencebetweenthe structuretrappingorgans．Itveryimprotant ofaminoacidsbetweenthe and containing hyphae、ⅣitIltrappingorgansthecommon inducein andto theserine of laboratory vegetative蛐ae，totraps analysis proteasegene for theconstructionofthe and Arthrobotrysoligosporaunderstanding trappingorgans mechanismof and nematodes．Sothe w弱carriedouLTheresults trappingkilling study Wereas