少孢节丛孢菌（rthrobotrys oligospora）捕食线虫生化机制研究.pdf

摘 要 寄生虫病特别是寄生性线虫病目前依然是严重危害畜牧业发展的大敌。对这类病 原生物的防治主要依靠抗蠕虫化学药物，但化学驱虫药物不可避免地产生了抗药性、 药物残留和生态环境污染三个方面的问题。为了解决化学驱虫药物防治家畜寄生性线 虫病所带来的上述弊端，促进畜牧业的可持续发展，需要寻求新的家畜线虫病防治方 法。目前，研究最多、最深入且最有应用前景的就是利用寄生性线虫的自然天敌一捕 食线虫性真菌进行生物防治。但要想很好达到实际应用捕食线虫性真菌的目的，首先 必须弄清这类真菌发挥作用的详细过程和生化机制问题，为此本课题主要进行了以下 相关研究： (1)将秀丽新杆线虫(Caenorhabditis elegans)作为实验动物模型，引入了对捕 食线虫性真菌一少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)捕食过程的观察研究。结果 表明：秀丽新杆线虫(Caenorhabditis 生捕食器，且最快可于加入虫体后的2h将线虫虫体捕获，捕食器同虫体接触部位的 菌丝比未接触处的菌丝粗大，而且表面粗糙似有粘液性物质存在；在捕食性菌环细胞 的边缘存在大量大小不均的电子致密体。真菌捕食器同虫体的接触部位多集中在虫体 的头部和尾部，表明在这些部位存在某些特异性的作用位点；在线虫和真菌菌环接触 部位的表皮有明显的凹陷，说明在捕食的开始阶段机械力的作用确实存在：真菌在穿 透线虫体壁后先是形成侵染球，继而再由侵染球发育为菌丝，在此过程中线虫内容物 发生降解，菌丝逐渐充满整个虫体内腔，虫体最终崩解消失。 (2)通过对捕食线虫性真菌一少孢节丛孢菌(Arthrobotrysoligospora)生长所需 最佳碳源、氮源、碳氮比值及培养基初始pH值的优化，发现在固体培养基上，蔗糖 和L一谷氨酸是最好的碳氮源；在pH值为6．8的固体培养基中，对菌丝生长最适合的 碳氮比值为5：1；最适合菌丝生长的pH值范围是7．0--8．5。在液体培养基中，玉米 粉和硫酸铵对于菌丝生长是最优的碳氮源；对pH值为6．8的液体培养基来说，最佳 的碳氮比值为10：1；最适合的pH值范围是5．5～6．0。 器诱导效力进行了试验，发现加入一定浓度某些种类的氨基酸后，可以诱导少孢节丛 孢菌产生捕食器，并能捕食线虫幼虫；并且不同种类氨基酸对少孢节丛孢菌产生捕食 器的影响不同，其中以浓度为0．059／L的L一苯丙氨酸、L一蛋氨酸、DL一缬氨酸的诱导 效果较好；L-苏氨酸、L_异亮氨酸、L一亮氨酸、L一色氨酸和L一缬氨酸属于中等；L一 赖氨酸、L一谷氨酸和L一组氨酸溶液表现较差。生长初期和中期加入氨基酸的试验组 捕食器产生良好，且前者明显好于后者。说明氨基酸主要刺激新生菌丝产生捕食器。 (4)通过分析含捕食器菌丝、普通营养菌丝和寄生性线虫第3期幼虫的生化组 分发现：少孢节丛孢菌捕食器(菌环和菌网)粗蛋白质和各种氨基酸的含量大多数都 高于分生孢子和普通营养菌丝，但小于线虫幼虫的含量：进一步研究发现含捕食器菌 丝中含有一些普通营养菌丝所不具有的蛋白质，且前者的蛋白酶水解活力也明显大于 普通营养菌丝；此外，普通营养菌丝总糖的含量为30．69％，高于含捕食器菌丝(菌 环和菌网)24．77％的总糖含量。这表明捕食器菌丝的化学组成与普通营养菌丝是不 一样的，普通营养菌丝在变成捕食器时，蛋白质、总糖及氨基酸等生化组分的含量均 ‘ 发生了改变。 (5)优化了少孢节丛孢菌捕食器表面聚合物提取的方法，研究了某些化学试剂、 酶和蛋白酶抑制剂对真菌生长和捕食作用的影响，初步了解了存在于捕食器表面并参 与捕食过程的物质种类及其作用，证实了表面聚合物在黏附线虫时具有重要作用，而 且这些物质主要为蛋白质或含蛋白质的化合物；同时还首次在含捕食器菌丝提取到的 表面聚合物中，检测到了蛋白酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性，且其活性显著高 于普通营养菌丝，间接证实了上述酶类物质可能在捕食过程中起关键作用。 (6)通过研究不同诱导剂物质和不同营养组成的液体培养基中培养的少孢节丛 孢菌发酵液后，发现培养基的组成成份和相关诱导剂能够显著影响少孢节丛孢菌的代 谢过程；而且秀丽新杆线虫刺激产生的培养基滤液和氨基酸刺激产生的培养滤液内所 含成分不同：蛋白酶活性越高的滤液中，