奶牛gm-cs的克隆、表达、活性检测与乳房炎治疗试验.pdfVIP

摘 要 奶牛乳房炎是奶牛乳腺发生的一种炎症，是一种复杂的、导致奶牛业经济损失最严 重的疾病。尽管西方一些国家对此病已进行了100多年研究，但至今未能提出一个彻 底解决的办法。 粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(granu]ocyte—macrophage 呈集落性生长(即形成集落)。GM-CSF主要作用是对粒细胞系和单核细胞系的维持存活， 促进生长、诱导分化和增强功能等。本研究就是想利用GM-CSF的这一功能，结合抗菌 药与中药对奶牛乳房炎治疗的新方法进行初步研究，国内在该领域的研究尚未见报道， 为此我们主要进行了以下工作： 1． 奶牛GM—CSF的克隆、表达 BL21(DE3)中，经IPTG诱导进行蛋白表达，分子量大小为35KDa左右。 2． rboGM—CSF的纯化 方法来优化诱导表达条件，SDS分析发现重组蛋白大部分以包涵体形式存在。而 组蛋白。结果表明，应用尿素溶解包涵体，然后在含有递减浓度尿素的缓冲液中分步透 析复性，重组蛋白获得率较高；采用Ni-NTA亲和层析得到的重组蛋白纯度更高。 3． rboGM-CSF的生物学活性检测 采用了软琼脂集落刺激法和MTT比色分析法，对重组蛋白进行了生物学活性检测。 结果表明，经MTT比色分析，复性包涵体和Ni-NTA纯化蛋白均有明显的维持奶牛活化 淋巴细胞生长和增殖能力，Ni—NTA纯化蛋白在92ug／ml的浓度下促进淋巴细胞增殖能 力最强，还发现并不是rboGM—CSF浓度越高对维持活化淋巴细胞生长和增殖作用越强； rboGM—CSF能够刺激奶牛活化淋巴细胞在软琼脂中形成集落，进一步说明纯化蛋白具有 良好的生物学活性。 4． rb06M-CSF结合抗生素治疗奶牛隐性乳房炎试验 先后选择新西兰奶牛48头，按体细胞数分为两组，验订Erbo(；M—CSF单独使用以及与 抗菌药联合使用后，对不同体细胞数的奶牛隐性乳房炎的治疗效果。结果表明，单独使 loo万个／ml以上的却没有明显疗效；单独使用庆大霉素对二者的治愈率分别为33％和 与庆大霉素具有协同作用；注射rboGM-CSF后除了短暂的体温升高，对奶牛没有任何副 作用。 5． rboGM-CSF结合中药治疗奶牛亚急性临床型乳房炎 使用后所有奶牛临床症状消失，治愈率达到了87．5％，有效率为100％。 关键词：奶牛；GM—CSF；克隆；表达；活性检测；乳房炎 Abstract CowMastitisISaninflammationofbreastanda andthemost complex seriousdiseases of someWesterncountrieshasbeencarried dairy outmorethan100 industry．Although years ofthisdisease therehasn’ta tosolvethis research，but way problem completely． GM—CSFisproducedbyTcellsand mainfunctionof macrophagesprimarily．The GM-CSFiS tomaintainsurvivaland differentiationand promotegrowth．induced enhancementsof celllinesand celllines．The ofthis is granulocyte monocyte